陈沂
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院感染性疾病分子生物学教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丙型肝炎病毒F蛋白原核表达载体的构建、表达和纯化被引量：2
- 2009年
- 目的:构建丙型肝炎病毒(Hepatitis Cvirus,HCV)F蛋白的原核表达载体,表达pET32a(+)-HCVF融合蛋白。方法:根据丙型肝炎病毒F基因的全序列设计引物,以HCV1a型cDNA质粒H/FL为模板,通过PCR方法扩增得到F基因的编码区序列,将其定向克隆于含有6×Histag的原核表达载体pET32a(+),转化大肠杆菌JM109,经菌落PCR筛选,双酶切和测序鉴定阳性克隆后,转化大肠杆菌BL21,采用IPTG诱导表达融合蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳分析和Western-blot检测鉴定,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化。结果:F基因以正确的方式插入到pET32a(+)载体中,重组质粒转化大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达,出现了与预期分子量相符的蛋白条带,该蛋白通过Westernblot检测具有6×Histag蛋白的免疫学活性。结论:成功构建了丙型肝炎病毒F蛋白的原核表达载体pET32a(+)-HCVF并表达和纯化出重组融合蛋白,为进一步研究F蛋白的生物学功能奠定了基础。
- 高亚丽刘娇刘湘汤华陈沂蔡雪飞唐霓
- 关键词：丙型肝炎病毒F蛋白原核表达
