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魏娟
作品数:
1
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供职机构:
南京大学医学院临床学院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
舒小闯
南京大学医学院临床学院
汪芳裕
南京大学医学院临床学院
刘畅
南京大学医学院临床学院
王文辉
南京大学医学院临床学院
沈芸竹
南京大学医学院临床学院
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王文辉
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汪芳裕
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魏娟
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舒小闯
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1篇
中华肿瘤杂志
年份
1篇
2013
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CpG甲基转移酶诱导紧密连接蛋白7和8基因表达下调对人结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响
2013年
目的探讨CpG甲基转移酶M.SssI对人结肠癌HT-29细胞中紧密连接蛋白7(claudin-7)和claudin-8表达的调节作用,及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法以50U/ml的M.SssI处理HT-29细胞24h(过甲基化组),采用重亚硫酸盐测序法检测claudin-7和claudin-8基因启动子区域CpG岛的甲基化状态,实时荧光定量PCR法检测claudin-8和claudin-8mRNA的表达,细胞免疫荧光技术和Westernblot法检测claudin-7和claudin-8蛋白的表达,Hoechst33342荧光染色法和流式细胞术检测HT-29细胞的凋亡,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HT-29细胞的增殖。同时设对照组(以2山PBS处理HT-29细胞)和5-Azacytidine组(以10I.t,moL/L5-Azaeytidine处理HT-29细胞)。结果过甲基化组claudin-7和claudin-8靶序列中发生甲基化的CpG胞嘧啶数目分别为25和10个,对照组分别为9和5个,5-Azacytidine组分别为0和3个。过甲基化组claudin-7和chudin-8 mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组(均P〈0.05),而5-Azacyfidine组ciaudin-7和claudin-8mRNA和蛋白的表达均明显高于对照组(均P〈0.05)。Hoechst33342荧光染色结果显示,对照组和5-Azacytidine组的HT-29细胞均呈均匀蓝色荧光,细胞呈圆形,大小一致,无明显差异;而过甲基化组HT-29细胞呈高度白色荧光的凋亡细胞明显增多。流式细胞术检测结果显示,过甲基化组HT-29细胞的早期凋亡率比对照组增加84.7%(P=0.002)。MTr法检测结果显示,过甲基化组HT-29细胞的生长速度较对照组缓慢(P=0.002),HT-29细胞的增殖抑制率为32.1%;5-Azacytidine组HT-29细胞的增殖水平与对照组相似(P=0.084)。结论CpG甲基转移酶可以通过上调claudin-7和claudin-8基因启动子区的甲基化程度,下调HT-29细胞中claudin-8和elaudin-8mRNA和蛋白的表达,从而诱导细胞产生凋亡,并抑制其增殖。
王文辉
汪芳裕
魏娟
沈芸竹
刘畅
舒小闯
关键词:
HT-29细胞
紧密连接蛋白
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