池永东
- 作品数：12 被引量：35H指数：4
- 供职机构：西南民族大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 齐口裂腹鱼PGC-1α超表达及干扰慢病毒载体构建
- 2018年
- 利用基因重组方法构建齐口裂腹鱼PGC-1α超表达和干扰慢病毒载体,为最终阐明PGC-1α调控齐口裂腹鱼肌纤维类型转化的分子机理提供重要基础。根据GenBank上登录的齐口裂腹鱼PGC-1α基因序列(GenBank登录号为JN195738)设计引物,经过PCR扩增、双酶切、连接来构建PGC-1α超表达和干扰的慢病毒核心质粒,然后将其与穿梭质粒及包装质粒共同转染293T细胞包装成病毒颗粒,感染体外培养的C2C12成肌细胞,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测PGC-1α在被超表达和干扰表达慢病毒载体感染C2C12成肌细胞72h后的表达水平,确定其超表达及干扰效果。重组质粒FUGWPGC-1α-RFP及PsicoR-PGC-1α-GFP测序验证成功,包装后感染C2C12成肌细胞经qPCR检测后结果显示,超表达组PGC-1α基因表达水平极显著高于对照组(P<0.01),而转染shRNA1组及shRNA2组的PGC-1α基因表达水平极显著低于对照组(P<0.01),证明该基因被成功超表达和干扰。成功构建齐口裂腹鱼PGC-1α超表达及干扰慢病毒载体,为进一步研究该基因在成肌细胞分化中的作用提供重要的基础数据。
- 池永东陈智慧邱翔钟红梅陈官璐林亚秋
- 关键词：齐口裂腹鱼成肌细胞PGC-1Α慢病毒
- 藏系绵羊BMP4基因克隆及组织表达分析被引量：1
- 2018年
- 本试验旨在获得藏系绵羊BMP4基因序列,并分析其生物学特征,同时阐明该基因在不同组织中的表达情况。利用RT-PCR技术克隆藏系绵羊BMP4基因序列,利用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测其在藏系绵羊各个组织中的表达丰度。结果表明,获得藏系绵羊BMP4基因CDS序列1230bp,共编码409个氨基酸,为不稳定亲水碱性蛋白;与绵羊、牛、山羊、小鼠和人的氨基酸序列具有98%以上的相似性;潜在的磷酸化位点共33个。qPCR结果显示BMP4基因在藏系绵羊的各个组织中均存在广泛表达,且在肺组织中表达水平最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。本研究为进一步阐明BMP4基因在藏系绵羊脂质代谢中的功能奠定了基础。
- 池永东郑玉才金素钰黄林张津闽林亚秋
- 关键词：藏系绵羊BMP4
- 藏山羊KLF6基因克隆及组织表达分析被引量：2
- 2018年
- 本试验旨在获得藏山羊KLF6基因序列,并分析其序列生物学特征,同时阐明该基因在不同组织中的表达情况。利用RT-PCR技术克隆藏山羊KLF6基因序列,利用实时荧光定量PCR检测其在藏山羊各个组织中的表达丰度。结果表明,获得藏山羊KLF6基因序列1012 bp（登录号：KY677697）,其中包括5＇UTR序列3 bp和3＇UTR序列154 bp,CDS为855 bp,编码284个氨基酸,为无信号肽序列和跨膜结构域的稳定亲水酸性蛋白。KLF6基因在藏山羊的肺脏组织中表达水平最高,极显著高于其他组织（p〈0.01）,在脾脏和脂肪组织中也存在较高水平的表达。本研究为进一步阐明KLF6基因在藏山羊中的生物学功能奠定了基础。
- 池永东王永朱江江林森林森林亚秋
- 关键词：藏山羊KLF6基因克隆
- Wnt10b对山羊前体脂肪细胞分化相关基因表达的影响被引量：13
- 2018年
- 旨在利用RNA干扰技术,明确Wnt10b基因对山羊前体脂肪细胞分化的影响。设计合成山羊Wnt10b siRNA序列,利用胶原酶消化法获得山羊皮下和肌内前体脂肪细胞。利用有效的siRNA序列干扰山羊皮下和肌内前体脂肪细胞Wnt10b基因表达后,检测其对细胞分化及脂肪细胞分化标志基因表达的影响。结果表明,筛选获得有效的山羊Wnt10bsiRNA序列,转染山羊皮下和肌内前体脂肪细胞后,Wnt10b被显著干扰,其mRNA表达量分别下调63%(P<0.01)和67%(P<0.01);油红O染色结果显示,干扰Wnt10b基因可明显抑制山羊皮下和肌内脂肪细胞的脂滴积聚;且干扰Wnt10b基因后,在皮下前体脂肪细胞分化过程中C/EBPβ、PPARγ、SREBP1和Pref1基因出现极显著下调(P<0.01),LPL出现显著下调(P<0.05);而在肌内前体脂肪细胞分化过程中,AP2和LPL基因出现极显著下调(P<0.01),C/EBPβ出现显著下调(P<0.05),Pref1出现极显著上调(P<0.01)。本试验发现,Wnt10b基因可能通过调控C/EBPβ、PPARγ、SREBP1和LPL的表达来促进山羊皮下前体脂肪细胞分化,通过调控AP2、LPL、C/EBPβ和Pref1的表达来促进山羊肌内前体脂肪细胞分化。
- 林森林亚秋林亚秋许晴许晴池永东池永东
- 关键词：山羊RNA干扰
- 山羊KLF17基因克隆与组织表达被引量：1
- 2017年
- 克隆山羊Krüppel样因子17基因(KLF17)的c DNA序列,并检测其组织表达水平,为KLF17基因的功能研究奠定基础.随机选取2~3周岁的健康简州大耳羊和藏山羊羯羊各4只,屠宰采集山羊不同组织样品(心、肝、脾、肺、肾、肌肉和皮下脂肪),提取组织总RNA,利用RT-PCR法克隆山羊KLF17基因序列,进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(q PCR)法检测KLF17基因mRNA的表达水平.结果表明,克隆得到山羊KLF17基因c DNA序列1 450 bp,包含CDS区全长858 bp,5'UTR序列12 bp,5'UTR序列580 bp,编码285个氨基酸残基.其CDS区与牛、绵羊相比在5'端少99 bp,而在531位多出361 bp,这导致其编码区在858位提前终止.山羊蛋白序列较牛、绵羊少113个氨基酸残基.组织表达结果显示,KLF17基因在藏山羊肺中具有最高的表达水平,而在简州大耳羊皮下脂肪中具有最高的表达水平.两种山羊均在背最长肌中具有最低的KLF17表达量.这些结果表明KLF17可能在山羊脂质代谢过程中具有重要调控作用.
- 朱江江池永东林亚秋王永钟红梅
- 关键词：山羊克隆
- 山羊C/EBPα、C/EBPβ和C/EBPδ基因克隆及表达模式研究被引量：5
- 2020年
- 在克隆获得山羊C/EBPα、C/EBPβ和C/EBPδ基因序列基础上分析该家族成员序列特征,明确组织表达特性,并揭示3个基因在山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达情况。采用RT-PCR方法克隆山羊C/EBPα、C/EBPβ和C/EBPδ基因序列,利用相关的生物软件进行生物信息学分析,利用qPCR检测3个基因在山羊各组织及山羊肌内前体脂肪细胞成脂分化中的表达情况。克隆得到C/EBPα、C/EBPβ和C/EBPδ基因序列分别为1062,1056,873 bp,所编码的蛋白均为不稳定亲水碱性蛋白,均无信号肽和跨膜结构域。C/EBPα在皮下脂肪中表达水平最高,C/EBPβ和C/EBPδ均在肺中表达水平最高。在前体脂肪细胞分化过程中C/EBPα和C/EBPδ均在前体脂肪细胞分化前表达水平最高,随着分化时间的增加表达水平降低,C/EBPβ在肌内前体脂肪细胞中的表达随着诱导分化天数的增加而增加,在分化7 d时表达水平最高。基于以上研究,推测3个基因在山羊肌内脂肪细胞分化过程中发挥着重要作用。
- 池永东王永王永朱江江赵越
- 关键词：山羊基因克隆细胞分化
- 山羊不同组织器官的内参基因筛选被引量：8
- 2020年
- 本研究通过比较9个内参基因在山羊不同组织中的表达水平进而确定最适合研究山羊组织表达的内参基因。本试验以简州大耳羊为试验材料,利用实时荧光定量PCR技术分析9个内参基因(GAPDH,PPIA,18S rRNA,PPIB,UXT,RPLP0,ACTB,EIF3K和TBP)在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、瘤胃、背最长肌和皮下脂肪等组织中的表达差异情况,并利用geNorm、NormFinder和BestKeeper等程序分析了它们的表达稳定性。geNorm和NormFinder程序一致显示TBP表达最稳定,其次是UXT和RPLP0;BestKeeper分析显示18S rRNA表达最为稳定,其次为TBP和ACTB;3个程序一致认为GAPDH表达稳定性最差。综合3个程序分析得出TBP最适合作为山羊组织中的内参基因,其次为UXT和RPLP0,GAPDH表达稳定性最差,不适合作为山羊组织内参,这为后续研究其他目的基因在山羊组织器官中的表达模式提供数据保障。
- 池永东王永胡萌何小芳朱江江赵越赵越
- 关键词：山羊内参基因
- KLF11抑制山羊肌内前体脂肪细胞分化被引量：5
- 2020年
- 旨在获得山羊Krüppel样因子11(Krüppel-like factor 11,KLF11)基因序列,明确其组织及细胞表达模式,阐明KLF11对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响及可能作用途径。本研究利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术检测KLF11在山羊各组织及成脂诱导分化不同阶段细胞中的表达水平,利用油红O染色和qPCR等方法从形态学及分子生物学等角度确定干扰KLF11后对山羊肌内脂肪细胞分化的影响及可能的作用途径。结果表明,KLF11核苷酸序列总长为1 752 bp,CDS区为1 518 bp,编码505个氨基酸残基。KLF11基因在山羊各个组织中都有广泛表达,并且在肝、背最长肌及腹部脂肪中存在较高水平表达;KLF11在成脂诱导48 h的山羊肌内脂肪细胞中表达水平极显著高于诱导分化前(P<0.01)。筛选到干扰效率可达到63.58%的KLF11-siRNA1有效干扰序列,转染山羊肌内前体脂肪细胞后发现可明显促进山羊肌内脂细胞的脂滴积聚,且脂肪细胞分化标志基因PPARγ和C/EBPβ mRNA水平出现极显著上调(P<0.01),Pref-1 mRNA水平出现极显著下调(P<0.01);干扰KLF11基因后,KLFs有些成员(KLF1、KLF2、KLF4、KLF5、KLF8、KLF10、KLF14、KLF16)表达水平发生极显著下降(P<0.01),有些(KLF15)则出现相反的表达模式。KLF11基因可能通过调控PPARγ、C/EBPβ和Pref-1的表达抑制山羊肌内前体脂肪细胞分化,并且这种作用可能是通过协同KLF2、KLF4、KLF10,拮抗KLF7和KLF15来进行的。
- 王江林王永池永东池永东朱江江
- 关键词：山羊细胞分化
- KLFs转录因子在山羊成肌细胞分化过程中的表达模式被引量：2
- 2019年
- 本研究旨在研究KLFs家族6个成员(KLF3,KLF5,KLF7,KLF8,KLF9和KLF12)在山羊成肌细胞诱导分化过程中的表达模式及各个成员的相关性。利用qPCR检测KLFs在成肌细胞不同分化阶段中的表达丰度,并分析该家族成员间的相关性。结果显示,KLF3、KLF5、KLF7、KLF8、KLF9和KLF12在成肌细胞诱导分化过程中的表达水平逐渐升高,在诱导分化96 h的表达水平均极显著高于未诱导细胞中的表达水平(p<0.01);相关性分析结果显示6个成员mRNA表达水平存在极显著相关(p<0.01)。本研究明确了KLF3、KLF5、KLF7、KLF8、KLF9和KLF12在山羊成肌细胞诱导分化过程中的表达模式,为阐明该家族在山羊肌肉生长发育中的调控作用提供重要的基础数据。
- 吴静徐琎池永东林亚秋
- 关键词：山羊成肌细胞分化
- 藏山羊KLF6基因克隆及组织表达分析
- 本试验旨在获得藏山羊KLF6基因序列,并分析其序列生物学特征,同时阐明该基因在不同组织中的表达情况.利用RT-PCR技术克隆藏山羊KLF6基因序列,利用实时荧光定量PCR检测其在藏山羊各个组织中的表达丰度.结果表明,获得...
- 池永东王永朱江江林森赵越林亚秋
- 关键词：藏山羊遗传育种基因克隆
