范斌
- 作品数：7 被引量：21H指数：4
- 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区重大科技专项国家科技支撑计划新疆维吾尔自治区新疆少数民族科技人才特殊培养计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 新疆伊犁地区马疱疹病毒1型ORF30基因序列分析被引量：6
- 2018年
- 为研究马疱疹病毒1型(EHV-1-XJ2015)新疆伊犁分离株致病基因型,评估新疆EHV-1-XJ2015的潜在风险因素,本试验设计特异性引物,应用PCR技术扩增EHV-1-XJ2015分离株ORF30基因相应区域,连接至克隆载体,成功构建重组质粒pMD19-T-ORF30。测序结果表明,EHV-1-XJ2015毒株ORF30基因2 254bp处为A,且编码天冬酰胺(N),分析证明EHV-1-XJ2015基因型为非神经型毒株,毒力倾向表现为流产型毒株;遗传进化显示,EHV-1-XJ2015毒株与日本分离株90c16、00c19、HH1、NY03为同一分支,氨基酸同源性最高为100%。本研究结果为开展EHV-1分子流行病学调查研究及为新疆地区现有诊断方法和防控措施的评估提供理论依据。
- 范斌王燕阿玛古丽·朱马汉冉多良刘建华加尔肯
- 马疱疹病毒1型gB糖蛋白表位与小鼠C3d串联重组质粒免疫效果分析被引量：1
- 2017年
- 为了探究马疱疹病毒1型gB糖蛋白表位与小鼠C3d串联重组质粒的免疫效果。设计合成完整的抗原表位串联体B;以小鼠脾脏总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增出小鼠C3d基因;以EHV-1基因组为模板扩增出gB基因;构建重组质粒B-pVAX1、gB-pVAX1、C3d-pVAX1、B-C3d-pVAX1和gB-C3d-pVAX1;转染BHK-21细胞后能正常表达;将重组质粒免疫BALB/c雄性小鼠。结果表明:B-pVAX1免疫组抗体水平、IFN-γ和IL-4相对表达量均高于gB-pVAX1免疫组、C3d-pVAX1免疫组和对照(PBS)免疫组,差异极显著(P<0.01);B-C3dpVAX1免疫组抗体水平、IFN-γ和IL-4相对表达量均高于B-pVAX1免疫组、C3d-pVAX1免疫组和对照(PBS)免疫组,差异极显著(P<0.01);gB-C3d-pVAX1免疫组抗体水平、IFN-γ和IL-4相对表达量均高于gB-pVAX1免疫组、C3d-pVAX1免疫组和对照(PBS)免疫组,差异极显著(P<0.01);重组表位串联体B能够增强小鼠体液免疫和细胞免疫,同时C3d作为分子佐剂具有增强免疫的作用。
- 李静鲍子磊范斌胡月宋焕堂刘建华
- 关键词：B细胞表位重组质粒免疫效果
- 马疱疹病毒1型XJ2015株全基因组测序及分析被引量：4
- 2018年
- 马疱疹病毒1型(EHV-1)可引起马属动物多系统疾病,呈世界性分布并造成严重经济损失。为进一步认识EHV-1的分子特征,采用PCR分段扩增测序,利用ORF finder和Smart BLAST分析基因组结构及基因功能,用DAN Man和MEGA7.0进行基因组序列特征及核苷酸同源性分析。结果表明,XJ2015株全基因组序列长度为150 267bp。G+C含量为56.7%。结构简式为TRL-UL-IRL-IRS-US-TRS,包含80个开放阅读框,编码78个蛋白。同源性分析表明,32株病毒全基因组核苷酸同源性为86.74%,TRL/IRL高达99.49%,TRS/IRS仅为65.99%。XJ2015株与英国株Ab4同源性最高(93.58%),与美国株T-616同源性最低(76.72%)。首次获得并分析我国流行毒株EHV-1XJ2015全基因序列,为进一步研究EHV-1的遗传背景和进化关系及基因功能的挖掘提供理论依据。
- 胡月刘建华鲍子磊王世民范斌贾庆瑞王雪竹王思云冉多良
- 关键词：全基因组测序分子特征
- 马疱疹病毒1型gB糖蛋白线性B细胞表位的预测与鉴定被引量：3
- 2017年
- 试验旨在应用生物信息学技术综合分析马疱疹病毒1型(equine herpesvirus 1,EHV-1)gB糖蛋白,预测B细胞表位,筛选出具有潜在诊断价值的线性B细胞表位。将EHV-1gB糖蛋白的基因序列输入DNAStar软件中的Protean工作区中,经参数综合比较分析筛选潜在的B细胞表位,克隆、表达预测表位的基因片段,利用表达的融合蛋白作为抗原与马疱疹病毒阳性血清反应。经预测分析,gB糖蛋白的B细胞表位可能位于第6—10、23—32、53—65、72—98、111—120、152—166和173—180位氨基酸区域。本试验成功构建并原核表达含7个潜在B细胞表位的融合蛋白。Western blotting试验结果显示,其中5个融合蛋白能被马疱疹病毒阳性血清识别。本试验利用生物信息学技术结合分子生物学技术成功筛选到5个潜在的B细胞表位,为EHV-1表位诊断、表位疫苗抗原的设计奠定了技术基础。
- 李静刘建华付强宋焕堂范斌胡月冉多良
- 关键词：B细胞表位抗原表位预测原核表达
- 含EGFP基因的马疱疹病毒1型新疆株gE基因缺失株的构建被引量：3
- 2020年
- 为筛选马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis,ER)基因缺失减毒活疫苗的候选毒株,本研究参考GenBank中EHV-1(登录号:KF644579.1)目的基因序列设计同源臂引物,以本地区流行株XJ2015株DNA为模板PCR扩增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表达盒(CMV+EGFP+polyA)为标记基因,酶切后依次连接至载体pUC-19,成功构建重组质粒pUC-gEH1H2-EGFP。将XJ2015基因组与质粒pUC-gEH1H2-EGFP共转染至RK-13细胞进行同源重组,以EGFP为标记进行gE基因缺失毒株的筛选及纯化,并测定重组毒株效价。结果显示:经5轮荧光噬斑纯化、PCR及测序鉴定,成功获取一株携带EGFP基因的重组毒株XJ2015-△gE-EGFP,且重组毒株效价(107.1TCID50/0.1 mL)较原毒株(108.8TCID50/0.1 mL)下降约101.7TCID50/0.1 mL。采用同源重组技术成功构建了1株马疱疹病毒1型流行株gE基因缺失突变株,为未来筛选马鼻肺炎基因缺失弱毒疫苗奠定了基础。
- 范斌范斌贾钦瑞刘建华刘建华冉多良
- 关键词：马鼻肺炎
- 马疱疹病毒1型主要毒力基因分析及TK基因缺失载体的构建被引量：4
- 2018年
- 为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)主要毒力基因遗传进化情况并构建TK基因缺失株,本研究以EHV-1XJ2015株DNA为模板,对其主要毒力基因TK、gI和gE全长进行克隆、测序及生物信息学分析,并扩增TK基因左右重组臂TKL和TKR,构建质粒pUC-TKLR,将扩增后的增强绿色荧光蛋白(EGFP,含有CMV+polyA)插入pUC-TKLR质粒,构建TK基因缺失打靶质粒。TK、gI和gE基因同源性分析结果显示,XJ2015株与国外EHV-1分离株TK、gI和gE基因同源性均较高,分别为99.8%~100.0%、99.6%~100.0%和99.9%~100.0%;与EHV-3分离株同源性均最低,分别为72.9%、59.4%和62.1%;遗传进化分析显示,3个基因均与国外EHV-1同属于一个遗传进化分支,与EHV-9和EHV-4进化关系较近,但与EHV-3进化关系较远,表明XJ2015毒株与国外EHV-1毒株TK、gI、gE基因核苷酸上差异不明显,没有明显的地域性特征,功能基因保守且进化缓慢,同源基因功能相同或相近;经PCR扩增、酶切、测序及转染鉴定,本试验成功构建了用于TK基因缺失的打靶质粒pUC-TKLR-EGFP。通过对EHV-1主要毒力基因的分析及TK基因缺失打靶载体的构建,为新疆地区马鼻肺炎流行病学调查分析、TK基因缺失株的构建提供理论依据。
- 范斌陈卓刘建华鲍子磊胡月贾钦瑞王雪竹冉多良
- 新疆伊犁地区马疱疹病毒1型的分离与鉴定被引量：13
- 2016年
- 为鉴定新疆伊犁地区某马场疑似感染马鼻肺炎感染的病原,本实验采集流产胎儿肺组织,通过细胞培养、PCR鉴定、毒价测定、病毒中和试验、透射电镜观察以及病毒理化特性测定等方法进行了病毒的分离与鉴定。结果表明:MDBK细胞接种病毒后出现典型的细胞圆缩、细胞融合、细胞脱落和聚堆成葡萄串状等病变特征;毒价测定为TCID50106.2/m L;选择EHV-1的g B基因经PCR扩增,得到622 bp的特异性DNA片段;经理化特性测定该病毒不耐酸、不耐热、对紫外/氯仿/乙醚处理敏感;电镜观察可见圆形、有囊膜、直径大约为130 nm的病毒颗粒。综上所述,经分离与鉴定获得的病毒株生物学性质符合马疱疹病毒1型,并命名为EHV-1-XJ2015株。本研究在新疆伊犁分离到的马疱疹病毒1型属首次报道,为我国马鼻肺炎的防治奠定了基础。
- 杨永龙刘建华宋焕堂李静卢亚宾胡月范斌况玲冉多良
- 关键词：伊犁马
