魏小宁
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪轮状病毒DN30209株VP4全长蛋白表达及多抗制备和鉴定被引量：2
- 2014年
- 为开展猪轮状病毒(PRV)及其VP4蛋白相关特性研究,参照Gen Bank所收录的猪轮状病毒JL94、OSU等株序列设计一对特异性引物,从实验室分离鉴定的猪轮状病毒DN30209株扩增约2 330 bp VP4全长基因,并成功构建重组质粒VP4-p MD18-T。重组质粒经测序、序列比对及分析。结果表明,DN30209株VP4全基因长2331 bp,与参考株JL94的核苷酸同源性为99.7%,氨基酸同源性为99.5%。将VP4基因连接到p GEX-6P-1原核表达载体中,构建并筛选出阳性原核表达载体重组质粒VP4-p GEX-6P-1。阳性重组质粒转化Rosetta宿主菌感受态细胞中,经IPTG诱导,获得以包涵体形式表达的重组蛋白,融合蛋白大小约为112 ku,与预期大小相符。回收、纯化并复性该蛋白,将其作为免疫原免疫大白兔,制备兔抗PRV VP4全长蛋白多克隆抗体,间接ELISA测定多抗效价到1:105,间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western blot)检测表明该多抗均可与PRV具有很好的抗原抗体反应性,为猪轮状病毒研究提供有效实验材料。
- 任晓峰窦秀静郝雅环孙刘妹魏小宁
- 关键词：猪轮状病毒原核表达抗体制备
