施志玉
- 作品数：13 被引量：52H指数：4
- 供职机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省农业三项工程项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生金属学及工艺自动化与计算机技术更多>>
- 基于石墨烯与巯堇纳米复合物的电化学适配体传感器检测伏马菌素B1
- 电化学适配体传感器具有特异性强,测试费用低,不受样品颜色、浊度的影响,所需仪器设备相对简单、方便易行等优点.本文基于石墨烯与巯堇纳米复合物的信号增强放大作用和DNA适配体的特异性构建了一种灵敏、简便的检测玉米中伏马菌素B...
- 施志玉郑亚婷吴文达张海彬
- 关键词：伏马菌素B1
- 薄层色谱和高效液相色谱联合检测玉米赤霉烯酮的方法研究被引量：22
- 2010年
- 建立了薄层色谱法（TLC）定性检测和高效液相色谱法（HPLC）定量检测相结合的检测玉米粉中玉米赤霉烯酮（ZON）的方法。以石油醚∶乙醚∶冰醋酸（70∶28∶2）为展开剂,TCL定性检测ZON,ZON的比移值（Rf值）约为0.26。HPLC对ZON进行定量分析,ZON在0.25~5μg/mL范围内线性关系良好,回收率高,检测限为3μg/kg。试验表明：TLC快速、简便,可作为大批量、快速检测ZON的有效方法;HPLC精确、灵敏度高可作为定量检测ZON的有效手段。
- 吴文达王宝杰蔡兰芬何成华李治忠王希春刘海明施志玉张海彬
- 关键词：玉米赤霉烯酮TLCHPLC
- 玉米赤霉烯酮的高效液相色谱-荧光法检测技术研究被引量：10
- 2011年
- 建立了高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)定量检测饲料中镰刀菌毒素玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA,又称F-2毒素)的方法。采用层析柱和免疫亲和柱结合净化提取液的方法,确定乙腈-水(体积比为9∶1)为最佳提取溶液,荧光检测的激发波长(λx)和发射波长(λm)分别为274 nm和440 nm。色谱检测条件:流动相为甲醇-水-乙腈(体积比为10∶46∶44);检测波长为激发波长274 nm,发射波长440 nm;柱温25℃,流速0.6 mL.min-1。HPLC-FLD对F-2毒素进行定量分析,线性回归方程为y=1 416 362.246x+2 771.577(R2=1.000 0),加标回收率高达88.74%,检测限为5.7μg.L-1,相对标准偏差低于4.01%;F-2毒素在0.025～0.8μg.mL-1条件下,线性关系良好。结论:HPLC-FLD法精确、灵敏度高,可作为定量检测F-2毒素的有效手段。
- 刘胜利王莹何成华施志玉杨彦琼赵士侠吴康平张海彬
- 关键词：高效液相色谱-荧光法免疫亲和柱饲料
- 伏马菌素B_1噬菌体单链抗体库的构建与鉴定被引量：1
- 2013年
- 从伏马菌素B1(FB1)杂交瘤细胞株F3中扩增出V H和V L基因片段,再经重叠延伸PCR(SOE-PCR)拼接扩增得到单链抗体(ScFv)基因,然后克隆到pCANTAB 5E噬菌粒载体上,转化感受态大肠杆菌TG1,并经辅助噬菌体M13K07超感染,构建FB1毒素噬菌体单链抗体库,ScFv基因插入率为100%,库容约为1.5×107,噬菌体的滴度为2.1×1015PFU·mL-1。免疫亲和筛选和富集后,经ELISA法最终筛选得到5株可分泌阳性噬菌体抗体的细菌。结论:伏马菌素B1噬菌体单链抗体库构建成功。
- 王莹顾舒舒何成华王玉伟任喆施志玉赵士侠张海彬
- 关键词：伏马菌素B1单链抗体噬菌体抗体库
- 饲料中伏马菌素B1电化学生物传感器检测方法建立与应用
- 霉菌毒素(Mycotoxins)是由各种霉菌产生的一系列有毒次级代谢产物。在不同的霉菌毒素中，伏马菌素是世界上玉米种植区最常见的霉菌毒素，由于其与人类和家畜疾病有关，因此玉米谷物中伏马菌素污染被认为是一个严峻的问题。伏马...
- 施志玉
- 关键词：猪饲料伏马菌素B1电化学生物传感器高效液相色谱
- 饲料中单端孢霉烯族真菌毒素检测方法的探讨被引量：4
- 2009年
- [目的]为饲料中单端孢霉烯族真菌毒素的有效、快速检测提供理论支持。[方法]通过比较单端孢霉烯族毒素的检测方法,探讨了相关问题并预测了饲料中单端孢霉烯族毒素检测方法的发展方向。[结果]使用TLC检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测限可达20～300μg/kg。在羟基衍生化后用气相色谱电子俘获法检测A类单端孢霉烯族毒素的检测限为10～50μg/kg,衍生化或荧光酰化后检测B类单端孢霉烯族毒素的检测限可达20～50μg/kg,甚至更低。利用HPLC,以甲醇-水或乙腈-水混合物为流动相检测单端孢霉烯族毒素,其检测限为100～500μg/kg。利用LC-MS/MS检测单端孢霉烯族毒素的检测限可达0.8～10.0 ng/kg。[结论]随着技术的发展,将会有越来越多的优良分析检测方法用于检测饲料中的单端孢霉烯族毒素。
- 吴文达何成华王希春李治忠刘海明刘斌施志玉张海彬
- 关键词：真菌毒素单端孢霉烯族毒素饲料
- RNA解螺旋酶A表达系统的探究及其动力学研究
- 2016年
- [目的]RNA解螺旋酶A（RNA helicase A,RHA）参与许多细胞生物学过程中,并能促进艾滋病病毒1型（HIV-1）等一些病毒的复制,本试验旨在探究温度、p H值对RHA的动力学影响。[方法]利用PCR扩增全长RHA基因,构建重组载体p ET-28a-RHA和p Cold-Ⅰ-RHA,分别转化至BL21 star（DE3）和BL21、Rosetta2菌株中,加IPTG分别在28℃和15℃中诱导表达。将全长RHA基因重组到p Fast Bac Dual载体中,然后将重组穿梭载体转化到含有杆状病毒基因组的DH10Bac感受态细胞中,通过转座作用,将RHA基因整合到杆状病毒基因组中。提取重组杆状病毒基因组（重组杆粒DNA）,将重组杆粒DNA转染到sf9细胞中,收集细胞,纯化蛋白,可以得到完整的RHA。建立体外解螺旋反应体系,改变温度、p H值,检测RHA活性的变化。[结果]完整RHA在BL21、Rosetta2中可微量可溶表达。sf9可以表达有活性的完整RHA。反应温度降低时,解螺旋速率变小,RHA活性降低。p H值在6.5-8.0范围内,随着p H值升高,RHA活性升高;当p H值大于8.0时,RHA活性降低。[结论]完整的RHA在BL21、Rosetta2中可微量表达;有3＇-tailed解旋极性的RHA活性受温度、p H影响较大。
- 刘红蕊吴诚诚单衍可谢青云邢刚雷静施志玉孙海凤刘斐
- 关键词：RNAHELICASE大肠杆菌表达系统杆状病毒表达系统PH
- 基于石墨烯与巯堇纳米复合物的电化学适配体传感器检测伏马菌素B1
- 电化学适配体传感器具有特异性强,测试费用低,不受样品颜色、浊度的影响,所需仪器设备相对简单、方便易行等优点.本文基于石墨烯与巯堇纳米复合物的信号增强放大作用和DNA适配体的特异性构建了一种灵敏、简便的检测玉米中伏马菌素B...
- 施志玉郑亚婷吴文达张海彬
- 关键词：伏马菌素B1
- 硫酸化黄芪多糖佐剂活性的比较被引量：2
- 2009年
- 14日龄雏鸡200只,随机均分为10组,在用新城疫弱毒苗免疫的同时,6个试验组分别肌肉注射高、低剂量3种修饰的硫酸化黄芪多糖(sAPS)sAPS40、sAPS50和sAPS60,2个多糖对照组注射高、低剂量未修饰的黄芪多糖(APS),无佐剂对照组注射等量生理盐水,每天1次,连续3 d。分别于免疫后7、14、21、28 d翅静脉采血测定血清抗体效价;于免疫后14、21、28、35 d心脏采血测定T淋巴细胞增殖。结果表明,3种修饰多糖均能显著提高血清抗体效价、促进T淋巴细胞增殖,作用强于未修饰多糖,并有一定的量效和时效关系,高剂量提高血清抗体效价、低剂量促进T淋巴细胞增殖的效果较好,综合评价以sAPS60最好,可以作为新型免疫增强剂的候选药。
- 黄小燕胡元亮赵晓娜卢宇王效田施志玉李大鹏孙瑾鞠演孙峻岭
- 关键词：淋巴细胞增殖血清抗体效价
- 大肠杆菌表达的RNA解螺旋酶Ded1p的提纯与解螺旋机制被引量：1
- 2017年
- [目的]表达、提纯DEx H/D-box家族蛋白Ded1p,并综合传统电泳以及单分子荧光共振能量转移(sm FRET)技术,探究Ded1p的双链RNA解螺旋机制。[方法]原核表达、纯化出全长的Ded1p作为研究蛋白,并验证其解螺旋酶活性。以荧光对标记的带有3'末端单链RNA尾巴的13 bp双链RNA作为研究底物,基于全内反射的单分子荧光共振能量转移技术,在自制的样品通道内添加800 nmol·L-1Ded1p、2 mmol·L-1ATP/Mg2+以及研究底物进行解螺旋试验,再用自编的Matlab程序采集和分析数据,进而从单分子层面探究Ded1p的双链RNA解螺旋机制。[结果]首次通过Ni-NTA凝胶亲和层析与Capto-DEAE凝胶阴离子交换层析两步纯化手段,得到了大量纯净的、并且具有双链RNA解螺旋酶活性的Ded1p。Ded1p的sm FRET试验在单分子层面实现了对Ded1p打开13 bp双链RNA过程的实时观察。通过分析FRET的变化过程,首次提出Ded1p主要以一步解螺旋的方式打开双链RNA结构。[结论]原核表达、纯化的Ded1p具有RNA解螺旋酶活性;该Ded1p是以局部双链打开的模式解开RNA双链。
- 赵富林徐明飞谢青云单衍可雷静施志玉孙海凤刘斐
