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毛丽萍: 作品数：14 被引量：18H指数：3; 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

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应用Gibson Assembly方法构建狂犬病病毒SRV9株重组感染性cDNA克隆被引量：1: 2017年; 应用Gibson Assembly连接法精确快速构建狂犬病病毒SRV9株重组感染性cDNA克隆,为狂犬病病毒感染性cDNA克隆的构建提供新的方法。应用Gibson Assembly连接法在同一反应体系内,将多个片段和经限制性内切酶线性化的载体,按设计的顺序进行连接,实现多个片段的一步组装。设计带有20bp^30bp重叠序列的PCR引物,扩增得到带有重叠序列的狂犬病病毒5个结构蛋白基因和增强型荧光蛋白基因。扩增的片段和线性化的载体经胶回收纯化后,与Gibson连接液混合后,50℃反应60min,连接产物转化Stbl3感受态细胞,提取重组质粒,经PCR、酶切和测序鉴定,缺失了病毒伪基因Ψ区和糖蛋白基因的跨膜区并且将增强型荧光蛋白基因插入糖蛋白基因终止密码子前,构建了全长17 600bp的重组质粒,完成了重组全长感染性cDNA克隆的构建。; 王伟魏玉圆翟少华毛丽萍皮文辉简子健; 关键词：狂犬病病毒 GIBSON

利用电穿孔法对狂犬病病毒SRV9 Ψ区缺失株病毒的拯救及鉴定被引量：1: 2017年; 探讨电穿孔转染法对SRV9Ψ区缺失株重组病毒的拯救及鉴定。利用电穿孔细胞转染法,将纯化的Ψ区缺失株pcDNA-NPMG-L全长质粒和pcDNA-N、pcDNA-P、pcDNA-M、pcDNA-G和pcDNA-L辅助表达质粒共转染至BHK-21细胞中,并进行盲传,借助RT-PCR、间接免疫荧光试验、Western-blot及透射电子显微镜对重组病毒进行鉴定。结果显示,重组病毒能够产生绿色荧光,透射电子显微镜观察可见典型的弹状病毒,对重组毒株与亲本毒株G蛋白进行Western-blot验证,可获得相应目的条带。结果表明,通过电穿孔细胞转染法,能成功拯救出重组病毒SRV9Ψ区缺失株,为病毒的拯救提供新的转染方法,并能有效提高转染效率,为研发新型狂犬病疫苗提供参考。; 毛丽萍魏玉圆王伟翟少华程瑶文兆海简子健; 关键词：狂犬病病毒拯救

细粒棘球绦虫EgM123基因序列分析及EgM家族基因在虫体不同发育阶段的差异表达分析被引量：5: 2017年; 对细粒棘球绦虫EgM123基因进行分子克隆和生物信息学分析,同时对EgM家族基因在虫体不同发育阶段的mRNA转录水平进行初步研究。采集绵羊肝脏包囊中原头蚴,提取总RNA,通过RT-PCR获取EgM123纯化的PCR产物,克隆到pGEM-T载体并测序,对测序结果进行结构和功能的预测分析。以Actin基因为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR技术,对不同发育阶段,即其原头蚴和成虫的EgM4、EgM9、EgM123的表达量进行检测。结果表明,EgM123基因ORF为594bp,编码197个氨基酸,蛋白分子质量为21.959ku,等电点为7.94。EgM123蛋白无信号肽、跨膜螺旋区和卷曲螺旋结构,是一种亲水性的可溶性蛋白质,存在23个磷酸化位点。根据亚细胞定位预测显示,EgM123蛋白主要位于细胞核内。二级结构预测含α-螺旋9.64%、β-折叠22.84%、无规则卷曲62.94%。EgM123氨基酸序列中有6个潜在的抗原表位。RT-qPCR结果显示,成虫阶段EgM家族基因表达量极显著高于原头蚴阶段。在发育的同一阶段,EgM123基因极显著高于EgM4、EgM9基因的表达量。通过EgM家族基因在虫体不同发育阶段的mRNA转录水平,EgM123基因在虫体成虫阶段高表达,以期为筛选细粒棘球绦虫终末宿主疫苗候选基因提供理论依据。; 毛丽萍王正荣王伟魏玉圆翟少华甘尚权简子健; 关键词：细粒棘球绦虫抗原基因

狂犬病减毒脂质体口服冻干活疫苗免疫效果检测被引量：3: 2018年; 将制备的狂犬病rSRV。减毒口服冻干脂质体活疫苗配合以自制的复合佐剂，免疫小鼠、犬、猫，根据ELISA抗体定量检测方法，对免疫后小鼠血清IgG、小鼠粪便IgA、犬和猫血清IgO、犬和猫唾液IgA的ELISA抗体水平进行检测，其检测结果与注射狂犬病疫苗免疫效果进行对比。结果显示，复合佐剂＋rSRV9病毒口服免疫后70d，小鼠血清抗狂犬病特异性IgG抗体水平为4214．00U／mL，小鼠粪便中SIgA抗体水平为137．00U／mL；复合佐剂＋rSRV9病毒口服免疫犬120d抗体水平最高，犬抗狂犬痛特异性IgG抗体水平为1420．00U／mL，唾液中SIgA抗体水平为1199．00U／mL；猫抗狂犬病特异性IgG抗体水平为2088．00U／mL，唾液中SIgA抗体水平为1896．00u／mL。狂犬病疫苗口服组与注射组特异性抗体水平差异均不显著。结果表明，狂犬病rSRV9减毒口服冻干脂质体活疫苗的抗体产生水平已接近注射狂犬病疫苗的免疫效果，能够达到对动物的免疫效果。; 翟少华程瑶文兆海毛丽萍简子健; 关键词：免疫效果

一例犬外周神经鞘瘤的诊断: 2018年; 为了对一例患犬腕部肿物进行诊断,通过病史调查、触诊、直接数字化X射线摄影系统(DR)、血常规、生化指标等一系列检查后,临床上诊断为肿瘤,对肿瘤组织采样,经40g/L的甲醛固定后送新疆农业大学动物医学院病理诊断实验室检查。眼观,该肿物呈结节状,表面不平整,外有包膜包裹,大小为4cm×3.7cm×2.1cm。显微镜下观察,肿瘤组织呈现两种形态(Antoni A型和Antoni B型),为神经鞘细胞的增生,未见核分裂象。Antoni A肿瘤细胞型以纺锤形细胞增生为主,排列紧密,可呈束状、波浪状、栅栏状排列。Antoni B型的肿瘤细胞较少,呈纺锤形,排列稀疏,间质发生黏液样变性。经病理组织学观察,确诊为神经鞘瘤,且为混合型。; 文兆海闫书平胡远毛丽萍程瑶陈凯云翟少华简子健; 关键词：神经鞘瘤病理组织学肿瘤细胞

利用Gibson Assembly法构建狂犬病SRV9突变株全长基因组cDNA的克隆: <正>研究目的狂犬病病毒(Rabies virus,RV)共编码核蛋白(Nucleoprotein,N)、磷酸化蛋白(Phosphoprotein,P)、基质蛋白(Matrix protein gene,M)、糖蛋白(G...; 翟少华魏玉圆王伟毛丽萍程瑶文兆海简子健; 关键词：狂犬病病毒突变株; 文献传递

野生动物用狂犬病口服疫苗复合免疫佐剂与诱饵的筛选及其对免疫效果的影响被引量：1: 2017年; 本研究旨在筛选最佳的复合佐剂和口服疫苗诱饵组方,并将筛选出的复合佐剂口服免疫试验小鼠,检测免疫小鼠血清IgG和肠道IgA抗体效价。采用牛肉粉、鸡肉粉、鱼肉粉、奶粉、血粉为主要原料,以细菌脂多糖、氢氧化锌、枸杞多糖、甘露低聚糖为疫苗免疫佐剂,通过正交试验方法将复合免疫佐剂和口服疫苗诱饵与狂犬病SRV9病毒混匀后口服免疫试验小鼠,并对免疫动物血清IgG抗体效价进行检测。优化的复合佐剂组方是细菌脂多糖100μg、氢氧化锌0.8mg、枸杞多糖50mg、甘露低聚糖10mg,免疫小鼠血清IgG抗体含量为3.24mg/L,肠道IgA抗体含量为1.56ng/mL;在疫苗诱饵的投喂试验中,狼、狐狸、犬、猫对鱼肉味诱饵的采食率最高,其次是血味和奶味诱饵;诱饵与狂犬病SRV9病毒混匀后口服免疫小鼠28d后,血清IgG平均值为1.20U/L。本试验筛选出口服疫苗复合免疫佐剂,经筛选制备的鱼肉味诱饵具备高采食性,适合野生食肉类动物口服疫苗的制备。可增加狂犬病SRV9病毒的免疫效应,为进一步研发重组减毒狂犬病口服疫苗提供了必要的技术支撑。; 程瑶毛丽萍文兆海古丽麦拉.卡日简子健翟少华; 关键词：免疫效果

狂犬病病毒SRV9重排G蛋白病毒株的拯救及鉴定被引量：1: 2021年; 为了探究狂犬病病毒G蛋白的不同基因组排列位置对其毒力的影响,试验对狂犬病病毒SRV9重排G蛋白全长质粒进行测序比对及酶切鉴定,并采用反向遗传学技术将纯化后的重排全长质粒和辅助质粒共转染至BSR细胞中进行重排病毒拯救,然后采用RT-PCR扩增和间接免疫荧光方法检测盲传至第5代的重排病毒。结果表明:重排全长质粒经测序在各基因连接部位完全正确,L基因有3处碱基发生突变,转染后有少量BSR细胞产生绿色荧光;重排病毒片段经RT-PCR检测得到大小分别为1 589 bp、1 473 bp、812 bp和3 823 bp的目的片段,与预期结果一致;在共聚焦显微镜下,重排病毒能够产生大量的绿色荧光。说明利用反向遗传学技术可成功获得G蛋白重排的狂犬病病毒SRV9。; 毛丽萍毛丽萍简子健翟少华贺笋; 关键词：狂犬病病毒 G蛋白反向遗传学拯救脂质体转染法

犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救与鉴定: 2018年; 探究犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救及鉴定,为后期犬瘟热-狂犬病二联口服弱毒活疫苗的研制奠定基础。采用脂质体转染的方法,将纯化后的重组质粒(pcDNA-N-G-EGFP-CDVN-PM-L)与辅助性表达质粒(pcDNAN、pcDNA-G、pcDNA-P、pcDNA-L)共转染BSR细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光技术进行检测并鉴定。结果显示,对盲传至第6代、第9代病毒液进行RT-PCR检测,均出现与预期相符的目的片段(狂犬病病毒N基因片段大小为1 315bp,犬瘟热病毒CDV-N基因片段大小为1 653bp)。间接免疫荧光试验后在激光共聚焦显微镜下,试验组均可观察到大量绿色荧光表达。RT-PCR结果与间接免疫荧光试验结果相吻合,表明犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒拯救成功。; 文兆海毛丽萍胡远程瑶周海莹陈凯云翟少华简子健; 关键词：反向遗传学 RT-PCR 间接免疫荧光

利用Gibson Assembly法构建狂犬病SRV9ψ区缺失株感染性cDNA: 2017年; 本研究为高效构建狂犬病SRV9ψ区缺失株感染性cDNA克隆,在细胞内进行重组狂犬病病毒的拯救提供帮助。按照Isothermal in vitro recombination system or"Gibson Assembly"连接方法设计引物,分别扩增得到去除狂犬病SRV9标准疫苗株的伪基因区(ψ区)的首尾均存在互补序列的5个结构蛋白基因的目的片段。利用T5核酸外切酶、DNA聚合酶及T4连接酶的协同作用,两步即可获得狂犬病SRV9ψ区缺失株的感染性cDNA。本研究利用Gibson Assembly连接法成功高效构建了狂犬病SRV9ψ区缺失株的感染性cDNA。此方法避免了传统的酶切连接方法中繁琐的实验步骤,实现了多个基因片段间的无缝连接,大大提高了载体构建的效率,为进一步研究狂犬病病毒的基因功能提供高效的方法。同时也为Gibson Assembly法应用于其它载体的构建提供借鉴。; 魏玉圆王伟翟少华毛丽萍皮文辉简子健; 关键词：GIBSON 狂犬病病毒

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