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α-酮戊二酸半醛脱氢酶的定点突变及酶学性质变化被引量：2: 2017年; 3-HP是一种性质优良的化学中间体,以甘油为底物生产3-HP的研究备受青睐,而限制3-HP产量的主要原因是Ald H活力过低。对源于Azospirillam brasilense的α-酮戊二酸半醛脱氢酶(KGSADH)基因同源建模和结构分析,采用定点突变方法得到高活力KGSADH,将突变酶表达纯化,探讨酶学性质的变化。结果表明,TU-KGSADH(E120D/P219A)酶活力达6.03U/mg,比原始酶比酶活提高了322%,最适温度由35℃降低为30℃,且热稳定性降低,最适p H为8.0,在p H 6.0-8.0条件下酶活力有所提高。Zn^(2+)对KGSADH的酶活有较强的抑制作用,而Co^(2+)、Fe^(3+)、Fe^(2+)对KGSADH的酶活有较大的激活作用。在酶的动力学方面,TU-KGSADH对乙醛的K_m由7.58降为6.28 mmol/L,V_(max)由10.6提高为12.3 U/mg。对酶学性质改变的因素分析发现,120位突变与最适p H下降和p H稳定性向酸性偏移有关,219位突变可能是最适温度和热稳定性降低的原因,为醛脱氢酶进一步定向改造提供参考。; 秦海彬熊涛张博牛坤; 关键词：定点突变表达纯化酶学性质

一种重组大肠杆菌及合成3-羟基丙酸中的应用: 本发明公开了一种重组大肠杆菌及合成3-羟基丙酸中的应用，所述重组大肠杆菌是将甘油脱水酶基因dhaB123、甘油脱水酶再激活因子基因gdrA、α-酮戊二酸半醛脱氢酶突变体编码基因TUkgsadh和甘油三磷酸脱氢酶编码基因g...; 牛坤郑裕国熊涛秦海彬黄建峰柳志强; 文献传递

一种生产3-羟基丙酸的重组大肠杆菌及应用: 本发明公开了一种生产3-羟基丙酸的重组大肠杆菌及应用，所述重组大肠杆菌是将甘油脱水酶基因dhaB123、甘油脱水酶再激活因子基因gdrA、α-酮戊二酸半醛脱氢酶突变体编码基因TUkgsadh和甘油三磷酸脱氢酶编码基因gp...; 郑裕国牛坤熊涛秦海彬黄建峰柳志强; 文献传递

一种重组大肠杆菌及合成3-羟基丙酸中的应用: 本发明公开了一种重组大肠杆菌及合成3‑羟基丙酸中的应用，所述重组大肠杆菌是将甘油脱水酶基因dhaB123、甘油脱水酶再激活因子基因gdrA、α‑酮戊二酸半醛脱氢酶突变体编码基因TUkgsadh和甘油三磷酸脱氢酶编码基因g...; 牛坤郑裕国熊涛秦海彬黄建峰柳志强; 文献传递

3-羟基丙酸合成途径的构建及优化: 3-羟基丙酸（3-hydroxypropionic acid，3-HP）因其优良的性质和广泛的应用前景，被美国能源部列为全球12大最具潜力的化工产品之一。但目前生物法合成3-HP最主要的问题其产量较低，因此开发优良的基因...; 熊涛; 关键词：3-羟基丙酸甘油脱水酶醛脱氢酶辅酶再生代谢途径

代谢工程改造Escherichia coli生产3-羟基丙酸: 2017年; 以提高3-羟基丙酸的产量为目标,对实验室构建的基因工程大肠杆菌进行改造,敲除形成副产物1,3-丙二醇的主要酶基因——乙醛脱氢酶基因yqh D,得到E.coli W3110Δyqh D(p CDFDuet-tac-gpd1-TUkgsadh/p ACYCDuet-tac-dha B1-4),该工程菌摇瓶发酵产量达到2.53 g/L,相比未敲除yqh D基因的菌株,产量提高了5.8倍。另外,敲除了甘油代谢途径中的抑制因子glpR基因,得到E.coli W3110ΔglpR(p CDFDuet-tac-gpd1-TUkgsadh/p ACYCDuet-tac-dha B1-4),该工程菌摇瓶发酵产量达到2.86 g/L,相比未敲除glpR基因的菌株,产量提高了6.7倍。后经5 L罐发酵培养后,3-羟基丙酸的产量提升到15.4 g/L。该实验为进一步利用大肠杆菌工程菌发酵生产3-羟基丙酸提供了研究基础。; 程秀丽秦海彬熊涛牛坤; 关键词：3-羟基丙酸基因敲除重组大肠杆菌

一种生产3-羟基丙酸的重组大肠杆菌及应用: 本发明公开了一种生产3‑羟基丙酸的重组大肠杆菌及应用，所述重组大肠杆菌是将甘油脱水酶基因dhaB123、甘油脱水酶再激活因子基因gdrA、α‑酮戊二酸半醛脱氢酶突变体编码基因TUkgsadh和甘油三磷酸脱氢酶编码基因gp...; 郑裕国牛坤熊涛秦海彬黄建峰柳志强; 文献传递

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熊涛