牛丽华
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：山东农业大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 一种改进后的重叠延伸PCR法对被孢霉重组载体的构建被引量：2
- 2013年
- 为了提高DNA大片段的拼接效率,通过引入逐次退火的PCR的方法,改良了传统的重叠延伸PCR方法。逐次退火PCR法,一方面延长了重叠区的PCR引物长度;另一方面把原来在1个循环中1个退火温度改成若干个,逐次降低退火温度,适用于Tm值相差比较大的引物;相邻的退火温度之间相差3-6℃。结果显示,通过此种方法成功拼接了ω3(2)和HCT两个大片段;PCR产物电泳条带单一,克隆测序证实序列完全正确,可以直接应用于后续试验。这种改进后的方法可以有效减少非特异性扩增,提高灵敏度,把这种方法称之为逐次退火重叠延伸PCR。
- 孟祥亮王宁新牛丽华李培光李洋黄大卫
- 关键词：突变
