- Cyclophilin D在氧化应激下人视网膜色素上皮细胞中的表达被引量：2
- 2016年
- 目的检测氧化应激下人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞内Cyclophilin D的表达,初步探索RPE细胞氧化损伤保护新靶点。方法培养细胞系ARPE19及人原代RPE细胞,相差显微镜下观察细胞形态,应用激光共聚焦显微镜免疫荧光法鉴定细胞。不同浓度H_2O_2(0μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、500μmol·L^(-1)、1 mmol·L^(-1))处理细胞24 h后,应用RT-PCR检测Cyclophilin D在细胞内的表达。随后预先在部分细胞中加入3μmol·L^(-1)环孢素A(cyclosporin A,Cs A)处理30 min后再加入不同浓度H_2O_2(80μmol·L^(-1)、160μmol·L^(-1)、320μmo·L^(-1))2 h,即Cs A+H_2O_2组,应用乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)法检测细胞致死率,并与H_2O_2组的LDH释放量相比较。结果培养的ARPE19和人原代RPE细胞均表达RPE细胞特异性抗体RPE65。100μmol·L^(-1)H_2O_2处理细胞24 h后Cyclophilin D表达量明显升高,当H_2O_2浓度增加到500μmol·L^(-1)时,Cyclophilin D表达量降低,1 mmol·L^(-1)H_2O_2处理时,Cyclophilin D表达水平未见增加。在各H_2O_2组组间,LDH的释放量随着H_2O_2浓度的升高而增加;与H_2O_2组相比,Cs A+H_2O_2组LDH的释放水平明显降低(P<0.05)。结论氧化应激下RPE细胞内Cyclophilin D的表达升高,该蛋白表达的增加可能进一步导致氧化应激下细胞的死亡,Cs A可能成为RPE细胞保护的新策略。
- 何媛张纯涛刘瀛王霞刘旭任媛
- 关键词：氧化应激CYCLOPHILIN视网膜色素上皮细胞环孢素A
