王晓静
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：沈阳农业大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金辽宁省教育厅科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 米蛾β-actin基因cDNA片段的克隆及表达量检测
- 2016年
- 为克隆米蛾[Corcyra cephalonica(Stainton)]β-actin基因cDNA片段,建立米蛾β-actin基因实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,并评估其在实时荧光定量研究中作为内参基因的可靠性,利用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆获得米蛾β-actin基因cDNA片段,采用SYBR GreenⅠ染料法建立qRT-PCR方法,检测在米蛾卵、幼虫、蛹和成虫4个虫态中β-actin基因的表达量。获得了长为822bp的米蛾β-actin基因片段(Gen Bank accession:KJ599569),编码273个氨基酸残基;荧光定量标准曲线的Ct值检测范围为13~28,扩增效率为90.1%,相关系数R^2=0.992,溶解曲线分析结果显示产物为特异的单峰,其Tm值为(84±0.5)℃,符合定量要求;实时荧光定量结果表明,β-actin基因在米蛾不同发育历期中的表达水平无显著性差异(p>0.05)。成功建立了米蛾β-actin基因qRT-PCR方法 ,β-actin基因可以作为米蛾基因表达定量研究中的可靠内参基因。研究结果为β-actin作内参基因进行米蛾功能基因表达差异研究奠定了分子基础。
- 丛斌张明珠胡志凤段立佳王晓静张统书董辉
- 关键词：米蛾Β-ACTIN基因反转录PCR实时荧光定量PCR
