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TBL结合翻转课堂在临床免疫学检验教学中的应用被引量：4: 2020年; 为了不断深化教学改革,探索临床免疫学检验课堂教学新模式,在我校医学检验技术专业临床免疫学检验本科教学中探索TBL结合翻转课堂的教学模式改革,针对该种教学模式的调查问卷来评价本次教学模式改革的效果。结果显示TBL结合翻转课堂的教学模式的效果优于传统的LBL教学模式,学生的接受程度较高。; 仝岩陈恒李文博孙蕾赵志娟荣昊陈明心任伟宏; 关键词：TBL 临床免疫学检验教学模式

基于连续监测法快速检测HBsAg: 2022年; 目的建立乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)定性测定的快速连续监测法。方法摸索均相光激化学发光免疫分析技术检测HBsAg的反应时间条件,建立短时连续检测程序。使用分类回归树(CART)算法,根据10个组合分类变量建立阴阳性判断规则,同时根据阴性、阳性样本重叠区域,建立可疑判断规则。对连续监测法进行检出限验证,并比较连续监测法和第1次读数的阴性复检率。结果确定均相光激化学发光免疫分析技术检测HBsAg的2次温育时间分别为9 min、4 min,之后每分钟检测1次,连续3次,总反应时间为15 min。采用CART决策树建立了判断规则,在该规则下,样本验证阴性符合率为100%,阳性符合率为97.5%。训练样本风险指数为0.02,验证样本风险指数为0.011,均小于0.05。连续监测法在0.1 IU/mL时检出限验证符合要求。连续监测法的阴性复检率为2.55%,第1次读数方案的阴性复检率为7.64%,两者差异有统计学意义(χ^(2)=4.215,P=0.04)。结论连续监测法在满足定性准确性和低复检率要求下可缩短反应时间。; 陈明心王炜张岱任伟宏; 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原分类回归树

重组结核分枝杆菌精氨酰tRNA合成酶活性验证及晶体生长被引量：1: 2021年; 目的建立重组结核分枝杆菌ArgRS的制备方法,并验证重组蛋白的生物活性。方法将结核分枝杆菌ArgRS基因插入到pQE60质粒中,通过IPTG诱导表达重组蛋白,使用分子筛制备重组蛋白,并评价重组蛋白分子量。使用圆二色谱评价重组蛋白的折叠情况。通过Thermal Shift Assay进一步验证重组蛋白的生物活性。采用气相扩散法筛选晶体。结果使用pQE60载体获得了重组表达的ArgRS蛋白。凝胶过滤层析纯化重组蛋白并验证了其分子量与天然蛋白一致;Thermal Shift Assay证明重组蛋白的生物活性。使用气相扩散法获得结核分枝杆菌ArgRS分子晶体。结论成功制备出具有天然活性的重组结核分枝杆菌ArgRS蛋白,并获得蛋白质晶体。; 王炜陈磊陈磊陈明心张岱任伟宏; 关键词：结核分枝杆菌

结核分枝杆菌甲硫氨酰tRNA合成酶与底物及其类似物的结合比较: 2021年; 目的建立重组结核分枝杆菌甲硫氨酰tRNA合成酶(MetRS)的制备方法,分析底物及其类似物与重组蛋白的结合能力。方法将结核分枝杆菌MetRS(MtMetRS)基因置于不同启动子调控之下。通过表达筛选选择重组蛋白大量制备的条件,使用分子筛制备重组蛋白,并验证其分子量。使用Thermal Shift Assay比较MetRS底物及其类似物与重组结核分枝杆菌MetRS的结合能力。结果通过不同重组质粒的表达筛选,确定重组蛋白制备方法。Thermal Shift Assay分析提示甲硫基腺苷酸(methionyl-adenylate,MetAde)与焦磷酸同时存在时可以提高重组蛋白的热稳定性。结论成功制备出具有天然活性的重组MtMetRS蛋白;应以甲硫基腺苷酸和焦磷酸分子结构为方向,设计、筛选结核分枝杆菌MetRS抑制剂。; 王炜任伟宏任伟宏陈明心张岱张岱; 关键词：结核分枝杆菌

膜蛋白异源表达快速筛选方法建立: 2021年; 目的建立一种快速的膜蛋白异源表达筛选方法,并验证重组蛋白细胞内定位及完整性。方法使用重叠PCR方法将绿色荧光蛋白(GFP)基因与人CD81(h CD81)基因连接一起构成hCD81-GFP融合基因,重组基因克隆至pFastBac1载体上,使用昆虫细胞异源表达重组基因。通过观察绿色荧光信号判断重组蛋白的表达及定位。纯化重组蛋白,通过尺寸排阻色谱法和SDS-PAGE分析重组蛋白的大小。结果使用hCD81上游引物和GFP下游引物进行PCR扩增获得hCD81-GFP融合基因,在1000和2000 bp DNA Marker旁有一条带与融合基因hCD81-GFP大小近似。融合基因插入pFastBac1质粒后测序证明,插入的融合基因序列正确。分子排阻色谱及SDS-PAGE分析显示,hCD81与绿色荧光蛋白融合表达。荧光信号显示重组蛋白定位到细胞膜上,与hCD81分子的细胞定位一致。分子排阻色谱结果显示,重组蛋白的洗脱峰成高斯分布,提示纯化的重组蛋白分子体积均一。依据hCD81-GFP融合蛋白的洗脱体积16.859 mL计算出的重组蛋白分子量为58.34×10^(3)Mr,与重组蛋白的理论分子量56.10×10^(3)Mr近似;洗脱液的SDS-PAGE分析显示,重组蛋白条带与66.2×10^(3)Mr蛋白Marker位置近似。结论目标蛋白与绿色荧光蛋白连接,通过观察荧光信号,仅需少量的细胞培养即可判断重组蛋白是否表达。该方法可以加快重组蛋白的表达筛选。; 王炜陈明心陈明心陈磊张岱荆鹏伟荆鹏伟; 关键词：绿色荧光蛋白昆虫细胞

不同稀释介质对乙型肝炎病毒表面抗原定量检测的影响: 2023年; 目的确定在乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)定量检测中影响稀释结果的主要物质成分,为HBsAg稀释液的选择提供思路。方法分别使用生理盐水,50 g/L小牛血清白蛋白(BSA)、15 g/L小牛血清球蛋白(BGG)以及阴性血清对101份HBsAg阳性样本进行3倍稀释,计算稀释带来的偏差。分别将BSA和BGG配制成不同浓度稀释液,对10份HBsAg阳性样本进行3倍稀释,分析稀释后检测结果差异。分别使用生理盐水,50 g/L的BSA、15 g/L的BGG以及阴性血清对15例HBsAg阳性样本进行3倍稀释,然后分别将反应总时间控制在32 min、62 min、77 min和92 min,分别计算62 min、77 min和92 min检测结果相对于32 min检测结果的比值(即增幅),比较不同稀释组在92 min时的增幅。结果15 g/L的BGG稀释所得的回收率偏差最小。BSA不同浓度之间的稀释结果无明显差异,而BGG不同浓度之间稀释结果成负相关。15 g/L的BGG稀释组在92 min相对于32 min的检测浓度的增幅最大。结论15 g/L BGG作为HBsAg稀释液效果较为理想。; 陈明心王炜张岱任伟宏; 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原稀释液

基于FRET的p24抗原表位均相免疫探针构建及其在HIV抗体快速检测中的应用: 2024年; 目的基于基因编码的Förster共振能量转移(FRET)技术构建HIV p24抗原表位荧光蛋白探针并进行临床验证,为开发快速检测HIV p24抗体的均相免疫检测试剂奠定基础。方法以荧光蛋白ECFP、EYFP作为FRET的供体和受体,将p24抗原表位对应的核酸序列插入ECFP-Linker-EYFP探针骨架,采用定点突变构建p24荧光蛋白二聚化界面,通过pET28a载体构建其重组质粒,进而转化至E.coli BL21感受态细胞中诱导表达p24抗原表位荧光蛋白探针,并采用Ni柱及分子筛对探针进行纯化。筛选探针的最佳浓度,检测探针与p24多克隆抗体的结合能力及光谱学变化。选择60例HIV阳性患者血清和58例正常人血清,通过探针进行检测,通过特异性、敏感度、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率等评价探针对HIV p24抗体的检测效能。结果高通量测序结果显示p24抗原表位荧光蛋白探针构建成功,其理论分子量约为67kDa,最佳浓度为0.20 mg/mL。探针在结合p24多克隆抗体后在530/477 nm处荧光强度比值降低(2.13vs.1.47)。HIV阳性患者血清530/477 nm比值(1.42±0.21)明显小于正常人(1.76±0.11)(P<0.001),两组比值进行ROC曲线分析,得到曲线下面积为0.97,标准误0.02,P<0.001。分析结果表明,p24抗原表位荧光蛋白探针临床检测HIV p24抗体的敏感度为88.33%,特异性为100.00%,阳性预测值88.33%,阴性预测值100.00%,诊断效率为94.07%。结论成功构建基于FRET的p24抗原表位均相免疫检测探针,用于HIV/AIDS患者HIV p24抗体的检测初步显示出了较好的敏感性与特异性,明显缩短了检测时间,为进一步提高HIV p24抗体实验室检测的灵敏度和时效性提供了思路和依据。; 王露陈明心郭会军张岱张岱张艳美李强邓博文张艳美刘真桑锋; 关键词：艾滋病病毒 P24 荧光共振能量转移

HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA及HBsAg和HBV cccDNA相关性研究被引量：11: 2016年; 目的分析乙型肝炎(乙肝)病毒e抗原(HBeAg)阴性慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者血清乙肝病毒DNA(HBV DNA)、乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒cccDNA的相关性,探讨CHB患者肝细胞内外与活动性肝炎有关的病毒学转变过程。方法对南京第二医院64例未经治疗的HBeAg阴性的CHB患者均进行了肝穿刺获取肝组织样本。按照丙氨酸氨基转移酶>80U/L,HBV DNA>100 000拷贝/ml诊断为活动性肝炎,否则为非活动性肝炎的标准分为两组。化学发光法检测血清HBsAg,Taqman实时PCR法定量检测血清及肝组织中HBV DNA含量,同时检测肝组织中cccDNA。结果血清HBV DNA和血清cccDNA明显相关(r=0.483,P<0.01),和lg肝细胞内总cccDNA明显相关(r=0.723,P<0.01)。血清HBsAg和cccDNA及lg肝细胞内HBV DNA均没有明显的相关性。活动性HBeAg阴性的CHB患者的lg cccDNA及lg肝细胞内总HBV DNA,明显高于非活动性HBeAg阴性的CHB患者。活动性HBeAg阴性的CHB患者,乙肝病毒的复制效率(血清HBV DNA和cccDNA的比率)高出非活动性CHB患者20%以上。血清HBsAg水平及HBsAg与cccDNA的比率在两组患者间差异均无统计学意义。结论 HBeAg阴性的CHB患者,血清HBV DNA水平和cccDNA有明显的相关性,血清HBV DNA可以作为肝细胞内cccDNA含量的替代指标,代表着更高效的HBV复制效率。; 张岱陈明心王念跃任伟宏李延卿; 关键词：CCCDNA 乙型肝炎病毒表面抗原肝穿刺

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陈明心

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