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高雪: 作品数：12 被引量：45H指数：4; 供职机构：云南农业大学农学与生物技术学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金云南省重点建设项目云南省重点新产品开发计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>

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辣椒CaWRKY30转录因子的克隆、亚细胞定位及番茄斑萎病毒侵染下的表达分析被引量：4: 2022年; 为研究辣椒CaWRKY30转录因子与番茄斑萎病毒互作的响应机制,以辣椒湘研11为试验材料,通过RNA提取、RT-PCR、切胶纯化及克隆等试验获得CaWRKY30编码序列。生物信息学分析结果表明,CaWRKY30全长1122 bp,编码373个氨基酸,该基因编码的蛋白含有1个WRKY保守结构域和1个C_(2)H_(2)结构域,属于典型的Ⅱ(e)亚家族成员。系统发育分析表明,与马铃薯StWRKY22氨基酸序列的亲缘关系最近。本氏烟叶片亚细胞定位试验发现,CaWRKY30在本氏烟幼苗中定位于细胞核和细胞膜,并且导致细胞膜加厚。实时荧光定量PCR分析结果表明,观察番茄斑萎病毒机械摩擦接种辣椒后的病毒积累量,发现病毒积累量在接种1~14 d逐渐上升,在接种后14 d处于最大值,接种14 d后病毒积累量逐渐下降;同时,CaWRKY30受番茄斑萎病毒接种后诱导,在接种病毒1~14 d CaWRKY30表达量上调,14 d达到峰值,14 d以后表达量逐渐下降。综上,获得了CaWKRY30转录因子基因序列,该转录因子定位于细胞核和细胞膜,并初步阐述了辣椒CaWRKY30转录因子在番茄斑萎病毒胁迫下的表达趋势。; 贾志强许云玉高雪陶宏征陈增敏刘雅婷李永忠; 关键词：辣椒生物信息学番茄斑萎病毒

侵染昆明园林植物的4个HCRV分离株核壳体蛋白氨基酸序列分析被引量：2: 2021年; 【目的】比较分析侵染昆明园林植物HCRV核壳体蛋白氨基酸序列,探究地理分布和寄主来源与病毒变异的相关性。【方法】2016年,在云南省昆明市园林景区采集疑似感染番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒样品,利用RT-PCR技术测定出葱莲(Zephyranthes candida)、文殊兰(Crinum asiaticum)、喜林芋(Philodendron schott)和酢浆草(Oxalis corniculata)4份感染朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)的样品,通过克隆、测序获得4份样品的S RNA序列,利用ORF Finder获得核壳体蛋白(nucleocapsid protein,N)并进行序列分析。【结果】文殊兰、喜林芋和酢浆草是首次报道的HCRV新寄主;4个HCRV分离物的N蛋白与NCBI首次报道的HLS1-2 N蛋白(登录号:AFX74694)一致性达到99.34%;系统进化树分析显示:4个HCRV分离物与GenBank公布的同样来自云南的株系聚为1支。【结论】病毒的地理分布相关性强于寄主相关性。; 王宇琪吴保为陶宏征贾志强高雪王景文刘雅婷

魔芋病虫害及绿色防控研究进展被引量：12: 2017年; 魔芋(Amorphophallus konjac)是世界上最重要的葡甘露聚糖作物之一。我国魔芋主要分布在长江中上游地区,其病虫害一直都是关注和研究的重点。本文综述了魔芋主要病虫害的种类及现有防控技术,针对低毒药剂防控存在的一些不足,建议采用物理防控、生物防控、农业防控和生态防控相结合的绿色防控技术。提出推行绿色防控技术,有利于提高魔芋品质,实现魔芋绿色、优质、可持续发展。; 高雪强远华梁社往陶宏征许云玉杨宝菊刘雅婷; 关键词：魔芋病虫害绿色防控

病毒载体介导的基因沉默体系对朱顶红褪绿环斑病毒NSm基因的沉默效应: 2023年; 为探讨烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)载体介导的基因沉默技术对朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)运动蛋白基因NSm的沉默效应,以本氏烟Nicotiana tabacum为材料,构建靶向HCRV NSm序列的基因沉默表达载体pTRV2-NSm,经农杆菌Agrobacterium介导侵染烟苗,检测其侵染效率,人工接种HCRV到沉默表达载体处理过的烟苗,通过观察发病症状、统计病情并应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测TRV介导的基因沉默体系对HCRV侵染的沉默效应。结果表明,pTRV2-NSm沉默表达载体对本氏烟植株的侵染率达到95.00%,并且对本氏烟的生长无明显影响;与对照相比,经沉默载体处理的烟草植株接种HCRV后发病率显著降低,在接种后14 d发病率下降了90个百分点,病毒积累量明显下降,随着时间延长pTRV2-NSm对病毒的抑制效果持续升高,在接种后14 d对病毒病的防治效果最高,达93.13%;qRT-PCR检测发现基因沉默表达载体在21 d内能持续有效表达。表明本研究构建的基因沉默体系能有效沉默HCRV NSm的表达,同时降低HCRV在烟草上的发病率和积累量。; 许云玉李浩陈敏贾志强高雪陈增敏赵于丁刘雅婷李永忠; 关键词：运动蛋白

番茄斑萎病毒侵染辣椒后病毒积累量动态变化被引量：2: 2023年; 为探究番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus, TSWV)侵染感病辣椒品种‘萧新19’后病毒积累量变化规律,本研究将TSWV人工摩擦接种于‘萧新19’植株,通过症状学观察、血清学及半定量RT-PCR三者结合的方式监测接种后第1、7、14、21、28、35天(days post inoculation, dpi)的‘萧新19’新叶的发病情况。利用实时荧光定量PCR技术对6个时期样品的病毒积累量进行定量检测分析。症状学观察发现在14 dpi‘萧新19’才开始表现症状,随后病症逐渐明显,伴随有同心环纹、坏死斑点、褪绿等症状,随时间推移病症逐渐加重。血清学及半定量RT-PCR检测均表明TSWV接种成功。RT-qPCR病毒积累量的检测结果显示,在14 dpi‘萧新19’叶片病毒的积累量达到最高,在1~14 dpi里辣椒叶片病毒积累量呈上升趋势,14 dpi后病毒积累量呈下降趋势。研究表明只有当‘萧新19’新叶的TSWV量积累到一定水平时,寄主才会显症,这为下一步辣椒的早期诊断和防控提供了新思路。同时感病辣椒品种‘萧新19’的TSWV积累量整体呈现“先增后降”的变化规律,也为后续辣椒TSWV感病机制相关研究提供了理论基础。; 许云玉贾志强高雪陈增敏李永忠刘雅婷; 关键词：番茄斑萎病毒实时荧光定量PCR 辣椒

云南省不同地区烟草上TSWV NSs氨基酸序列分析被引量：1: 2021年; 【目的】探究不同正番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)分离物中NSs与其地理来源和寄主二者之间的相关性,阐明云南不同地区8个烟草样品TSWV NSs适应性进化情况。【方法】利用RT-PCR、克隆、转化和测序技术,从云南不同地区已经确定感染TSWV的8份烟草样品中获得NSs氨基酸序列。采用DNAMAN 8.0和MEGA 7.0软件,对云南不同地区8个烟草样品与GenBank公布的烟草、番茄和辣椒上31个TSWV NSs氨基酸序列进行比对分析。通过The Selecton Server软件,对云南不同地区8个烟草样品TSWV NSs氨基酸序列进行选择压力分析。【结果】云南不同地区8个烟草样品与同样来自中国云南烟草、番茄和辣椒上TSWV NSs氨基酸序列在系统发育树中处于同一支,亲缘关系最近;与来自韩国的番茄和辣椒上TSWV NSs氨基酸序列位于同一大支,亲缘关系较近;而与来自欧洲保加利亚烟草上TSWV NSs氨基酸序列处于不同分支,亲缘关系最远。在云南不同地区8个烟草样品TSWV NSs氨基酸序列中未检测到正选择位点。【结论】不同TSWV分离物中NSs与其地理来源有明显的相关性,但跟寄主的相关性不大。云南不同地区8个烟草样品TSWV NSs稳定的保持其增强病毒症状、抑制沉默等功能。; 王景文王偲博陶宏征高雪贾志强王宇琪李永忠刘雅婷; 关键词：烟草 TSWV NSS 氨基酸序列地理来源

云南不同地区蜘蛛兰上朱顶红褪绿环斑病毒RNA S序列分析被引量：5: 2017年; 朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)是2013年首次发现并报道的番茄斑萎病毒属(Tospovirus)的新种,该病毒可引起蜘蛛兰产生同心环纹、叶片畸形、坏死斑等症状。本研究从云南省不同地区选出6份HCRV单独侵染的蜘蛛兰样本,通过RT-PCR、克隆、转化、测序和拼接,获得6份样本的HCRV分离物RNA S序列。6个分离物S序列长度在2 714~2 747 nt之间,其上编码的非结构蛋白NSs(Nonstructural protein by the S RNA)的NSs基因是1 332 nt,编码N(Nucleocapsid)蛋白的N基因是825 nt。通过生物信息学分析,确定了不同HCRV株系间的关系。同时对S RNA序列及其所编码的非结构蛋白NSs及核壳体蛋白N进行突变和重组分析,确定这6个HCRV分离物的RNA S序列均存在突变和重组事件。结合6个分离物采集地的环境信息,可以看出气候类型、温度等环境差异很大,因此推测云南省多样的气候类型跟HCRV在云南省的广泛分布有关,在这6个HCRV分离物中检测到的快速突变和重组可能是导致HCRV快速适应不同环境,分布范围广泛的原因之一。最后,通过系统进化分析,推测采集自云南省保山市的HLSTCRH是6个HCRV分离物中最先开始进化的,由它分为两个进化支,一支包括玉溪的YN-YX-HT-1和德宏瑞丽的HLS-YNRL-1,另一支包括昆明的HLS-YL,红河的HLS-HHXY以及临沧的HLS-LC-YLHW。; 高君直吴保为高雪白继龙李文贵飞进强刘雅婷李永忠; 关键词：番茄斑萎病毒属突变

水稻细菌性条斑病菌和白叶枯病菌的多重PCR检测体系开发被引量：3: 2016年; 本研究设计水稻细菌性条斑病菌和水稻白叶枯病菌的专化性引物,建立了可同时检测这两种细菌的多重PCR检测体系。通过体系优化、特异性和灵敏度检查,结果表明:两对专化性引物X-b和X-t具有较高的特异性和灵敏度,对水稻细菌性条斑病菌液和水稻白叶枯病菌液的检测灵敏度分别为104cfu/m L和105cfu/m L;利用本研究建立的多重PCR体系,成功地从50种市售水稻种子中检测出1个水稻品种带有水稻细菌性条斑病菌,1个水稻品种水稻白叶枯病菌。本研究建立了多重PCR检测体系,为检疫部门控制这两种检疫性种传病害的入侵提供了有效检测技术和手段。; 岳凯高雪曹红云谷安宇徐雨然徐烨刘雅婷李小林; 关键词：水稻细菌性条斑病菌水稻白叶枯病菌

番茄斑萎病毒侵染辣椒苗期的差异基因表达分析被引量：1: 2022年; 为了研究番茄斑萎病毒与辣椒的互作机制,探究病毒侵染后mRNA表达谱,本研究选用‘萧新19’为试验材料,利用Illumina RNA-seq测序平台进行转录组测序,将所得高质量的序列(Clean reads)与CM334_Annuum.v.2.0参考基因组进行比对。结果显示,有74.09%~76.91%数据比对到唯一的基因组位点。采用FPKM法计算基因的表达量,并在此基础上以FDR≤0.05和|log_(2)FC|≥1为条件筛选出2组样本间差异表达基因。对差异基因进行Gene ontology(GO)和KEGG富集分析,通过排列前5的GO分析发现,主要分子功能有催化活性、结合等过程,差异表达基因显著富集到次生代谢物的生物合成、苯丙烷类生物合成、亚麻酸代谢等过程。从苯丙烷类合成途径和转录因子中挑选基因用RT-qPCR来验证转录组测序的真实性。通过研究发现,辣椒与番茄斑萎病毒互作是一个复杂的过程,它由多个交叉通路调节,包括苯丙烷类生物合成、类黄酮生物合成、新陈代谢过程等,这为后期深入研究辣椒与番茄斑萎病毒互作机理奠定基础。; 贾志强高雪陶宏征刘雅婷李永忠; 关键词：辣椒番茄斑萎病毒转录组

云南省烟草正番茄斑萎病毒属病毒的调查和鉴定被引量：15: 2020年; 【背景和目的】烟草是云南省支柱产业,近年来烟草斑萎类病害发生严重。了解烟草斑萎类病害在云南的病原种类、病害发生、流行和分布势在必行。【方法】2012以来,本课题组从云南省10个地州市共采集疑似Orthotospovirus属病毒侵染的烟草样品38份,采用症状学观察、酶联免疫吸附反应以及RT-PCR鉴定。【结果】结果显示有20份烟草样品感染Orthotospovirus属病毒,其中番茄斑萎病毒单独侵染样品11份、朱顶红褪绿环斑病毒单独侵染样品4份、番茄环纹斑点病毒单独侵染样品2份、马蹄莲褪绿斑病毒单独侵染样品2份、番茄斑萎病毒和朱顶红褪绿环斑病毒复合侵染1份。【结论】本研究首次报道朱顶红褪绿环斑病毒侵染烟草,同时发现番茄斑萎病毒和朱顶红褪绿环斑病毒复合侵染烟草,鉴定结果对于科学制定烟草斑萎病害综合防治措施,保障云南省烟草种植业的持续健康发展具有重要意义。; 高雪王偲博李正洋杨宝菊飞进强刘雅婷; 关键词：烟草酶联免疫吸附反应 RT-PCR

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