叶松
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- 斑节对虾抗菌肽Penaeidin基因的克隆及其序列分析
- 2012年
- 目的克隆斑节对虾Penaeidin抗菌肽基因,构建克隆载体,测序后进行序列分析。方法从斑节对虾采集血淋巴后提取总RNA,经反转录得到cDNA,用特异性引物进行PCR扩增得到具有双酶切位点的重组Penaeidin目的基因片段。将其连接至PMD18-T载体,转化至Top10克隆菌进行克隆并测序,用生物信息学软件进行序列分析。结果测序结果表明斑节对虾Penaeidin抗菌肽基因全长225bp,编码74个氨基酸。将克隆所得的斑节对虾Penaeidin基因序列与NCBI数据库中的斑节对虾Penaeidin基因(FJ686016,AF475082)同源性为100%,与其它物种虾的Penaeidin基因同源性为48%～92%。分子进化树显示斑节对虾Penaeidin抗菌肽和印度对虾Penaeidin抗菌肽聚为一大枝,而圣保罗对虾、小褐美对虾、巴西美对虾、白滨对虾Penaeidin聚为一大枝,南方滨对虾Penaeidin则自成一枝。二级结构预测表明本次克隆得到的斑节对虾Penaeidin信号肽区为β折叠片,成熟肽主要为β折叠片和转角结构。成熟肽的N端和C端亲水性较强,N端为柔性区域。其中氨基酸序列30-40和60-70表现为潜在的T细胞抗原表位。结论成功克隆出斑节对虾Penaeidin基因,对其序列的分析结果将为后续的蛋白表达、工业化生产和理论研究奠定前期基础。
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- 关键词：斑节对虾抗菌肽克隆
