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利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼sf3a1基因敲除突变体: 2023年; 目的构建斑马鱼sf3a1基因敲除突变体,以研究剪接因子SF3A(splicing factor 3a)中SF3A1/Sf3a1在生物体中的详细生理功能及其调控机制。方法利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼sf3a1突变体,通过T7酶切及基因组测序筛选得到F0代及能够稳定遗传的F1代突变体,F1代自交后得到F2代,观察Sf3a1纯合缺失对斑马鱼生长发育的影响。结果基因型鉴定结果显示,得到2种不同类型突变品系,分别为−7 bp和(−2+13)bp。杂合sf3a1突变体正常存活且可育,而合子型纯合突变体斑马鱼胚胎发育出现明显异常,24 hpf胚胎发育迟缓,细胞出现大量凋亡,斑马鱼mRNA剪接发生异常,于72 hpf之前死亡。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建了斑马鱼sf3a1基因敲除突变体,为探索sf3a1对斑马鱼生长发育的影响提供了实验材料和依据。; 刘倩文潘军韩秋月周建峰荣小至荣小至; 关键词：斑马鱼

基于斑马鱼胚胎表型的Wnt/β-catenin信号通路小分子抑制剂的筛选方法: 2022年; 目的利用模式生物斑马鱼,建立1种基于胚胎表型的直观、快速的小分子抑制剂筛选方法,从而高效筛选和评价小分子化合物对体内Wnt/β-catenin信号通路的抑制活性。方法Wnt/β-catenin信号通路激活剂6-bromoindirubin-3-oxime(BIO)处理受精后6 h斑马鱼胚胎,检测胚胎48 hpf眼睛发育情况;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理6 hpf斑马鱼胚胎,检测48 hpf胚胎心脏不对称发育情况;小分子化合物与BIO共同处理6 hpf斑马鱼胚胎,检测斑马鱼眼部表型营救情况。结果Wnt/β-catenin信号通路激活剂BIO处理斑马鱼胚胎,48 hpf胚胎出现“无眼”表型;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂iCRT3、PNU-74654处理斑马鱼胚胎,48 hpf胚胎心脏左右不对称发育出现异常;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939、PNU-74654分别与BIO共同处理斑马鱼胚胎,48 hpf能够显著营救由BIO激活所导致斑马鱼的眼部缺失表型。已知Wnt/β-catenin信号通路异常激活与诸多癌症密切相关,实验为筛选具有靶向抑癌作用的先导化合物提供了高效、可靠、快速的筛选方法。; 王欣愉王彩霞刘倩文白艳周建峰荣小至; 关键词：WNT/Β-CATENIN信号通路小分子抑制剂斑马鱼

p53凋亡刺激蛋白——一个新的肿瘤抑制家族的研究进展被引量：1: 2012年; p53凋亡刺激蛋白家族(Apoptosis-stimulating of p53 protein,ASPP)是近年来新发现的蛋白家族,包括3个成员:ASPP1、ASPP2和iASPP。ASPP蛋白在C端具有保守的锚蛋白重复序列、SH3结构域和脯氨酸富集区。ASPP是首个被发现的能调节p53家族所有成员转录活性的蛋白家族。ASPP1和ASPP2可以特异性增强p53诱导促凋亡基因表达的能力,而iASPP会抑制p53的转录活性,对多种癌细胞的研究发现,AS-PP的异常表达与癌细胞抗肿瘤药物耐受性有关。此外,ASPP在细胞极性、器官形成和IGF信号通路中也起着重要作用。该文结合最新研究进展,对ASPP家族蛋白的结构和功能作一综述。; 刘成栋白艳李筠刘云章周建峰; 关键词：ASPP 抑癌基因肿瘤抗肿瘤药物

受体酪氨酸激酶Ror在Wnt信号通路中的功能研究进展被引量：1: 2012年; 受体酪氨酸激酶样的孤独受体Ror是一类保守的酪氨酸激酶受体,在细胞迁移、骨骼发育、神经系统发育及癌症发生中均发挥了极其重要的作用。Ror作为Wnt受体或共受体存在,通过多种途径激活或抑制Wnt信号通路,并参与到经典和非经典Wnts串联竞争中。Wnt5a能够与Ror2相互作用,且Wnt5a/Ror2信号通路在多种形态发生中起到关键调控作用。本研究结合最新研究进展,就Ror蛋白家族的结构、功能及对Wnt信号通路的调控机理进行了综述。; 白艳刘云章; 关键词：ROR WNT 信号通路发育

Rspo1调控斑马鱼胚胎汇聚延伸运动的研究: 2023年; Rspo1 (R-spondin 1)是分泌型Rspos (R-spondins)蛋白家族的成员,在雌性发育、血管生成和癌症等多个方面具有调控作用。为了研究Rspo1在早期胚胎发育中的功能,以斑马鱼(Danio rerio)作为模式生物,利用反转录PCR及原位杂交技术检测rspo1基因的时空表达模式;通过显微注射rspo1 mRNA或rspo1反义寡核苷酸(Morpholino, MO)对rspo1进行过表达或敲降;通过形态观察及原位杂交技术检测胚胎汇聚延伸(Convergence and extension, CE)运动是否正常;利用荧光素酶活性检测实验测定Wnt/PCP信号通路活性水平;通过蛋白印迹法检测表征Wnt/PCP信号通路活性的磷酸化JNK (Jun N-terminal kinase)蛋白的水平。结果显示:rspo1为母源基因,在12hpf前胚胎中呈全身性表达, rspo1的过表达或敲降均影响胚胎的CE运动;过表达rspo1降低Wnt/PCP信号通路报告质粒的活性,而敲降rspo1则增加其活性,与之相一致, rspo1敲降的胚胎中磷酸化JNK的水平显著升高;此外, rspo1 mRNA与dnJNK (Dominant negative JNK) mRNA的共同注射,以及rspo1MOs与wnt11或wnt5b mRNA的共同注射均能协同诱导CE运动缺陷。综上,在斑马鱼胚胎中, Rspo1通过负调控Wnt/PCP信号通路来调控胚胎的汇聚延伸运动。; 张欣张祺潘军周建峰白艳白艳; 关键词：斑马鱼

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白艳