黄芳
- 作品数：8 被引量：10H指数：2
- 供职机构：北京农学院动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：北京市属高等学校人才强教计划资助项目北京市教委资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 堆型艾美耳球虫外分泌蛋白致细胞损伤研究被引量：2
- 2021年
- 【目的】研究堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)外分泌蛋白是否具有外毒素和致细胞损伤作用。【方法】将牛肾传代细胞与E.acervulina子孢子共培养2.5 h,更换无血清培养液,每间隔12 h收集入侵后0~60 h的该时间点前12 h所有培养液并透析浓缩,SDS-PAGE和Western Blot检测,确定E.acervulina的外分泌蛋白,将此蛋白加培养液培养牛肾传代细胞,利用吖啶橙和碘化丙啶染色,判断细胞损伤。【结果】E.acervulina分泌约70 kD的蛋白,12~24 h分泌蛋白最多,24~36 h蛋白分泌量明显下降,36~48 h以后几乎看不到蛋白带,0~12 h和48~60 h看不到外分泌蛋白,用含该蛋白的培养液培养牛肾传代细胞,细胞膜和核膜的通透性增加,【结论】E.acervulina第一代裂殖生殖时分泌约70 kD的蛋白,该蛋白损伤细胞膜和核膜,证明该蛋白具有球虫毒素的功能。
- 王黎霞黄芳张建军安健
- 关键词：堆型艾美耳球虫体外培养细胞损伤
- 细胞凋亡对柔嫩艾美耳球虫入侵的影响被引量：4
- 2009年
- 为了研究球虫与宿主细胞间相互关系,利用含有6%乙醇的DMEM完全培养基培养对MDBK细胞进行凋亡诱导,通过膜联蛋白V(Annexin V)/PI染色法、HE染色法和吖啶橙染色法来鉴定MDBK细胞的凋亡情况。蔗糖密度梯度离心法获得的柔嫩艾美耳球虫子孢子与诱导凋亡的细胞共培养1 h后,利用HE和吖啶橙染色法来研究子孢子入侵细胞的状况。结果显示,在诱导凋亡的细胞中,没有发现柔嫩艾美耳球虫的子孢子,对照组未诱导凋亡的细胞中有子孢子入侵。表明球虫无法入侵诱导凋亡的细胞,进一步揭示了球虫在入侵过程中可能存在的识别机制和入侵机制,为将来开发新疫苗和新药物提供了基础数据。
- 韦铮黄芳王黎霞安健
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫子孢子细胞凋亡乙醇
- 堆型艾美耳球虫外分泌蛋白的鉴定
- 用六孔板培养MDBK细胞至细胞融合,每孔加入1×105个子孢子。入侵后,将细胞培养液更换为无血清培养基,无菌条件下收集入侵后12-60小时培养基并透析浓缩。SDS-PAGE检测在70KD左右发现一条清晰的蛋白带。将浓缩后...
- 王黎霞黄芳韦铮安健
- 文献传递
- 堆型艾美耳球虫MDBK细胞培养
- 本试验利用胰酶,鸡胆汁等按照不同配比组成的脱囊液,选择较好脱囊液配方使得脱囊率较高且对子孢子活性影响最小。比较不同浓度梯度离心的方法纯化子孢子的效率,选择最适宜得到纯净无菌的子孢子的密度梯度。通过试验证明10%鸡胆汁和0...
- 王黎霞黄芳韦铮安健
- 文献传递
- 堆型艾美耳球虫MDBK细胞培养
- 王黎霞黄芳韦铮安健
- 堆型艾美耳球虫外分泌蛋白的鉴定
- 王黎霞黄芳韦铮安健
- 堆型艾美耳球虫体外培养细胞的筛选及其发育研究被引量：2
- 2020年
- 【目的】为了选择适宜堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)培养的细胞。【方法】利用纯化的E.acervulina子孢子与不同细胞(非洲绿猴肾细胞、牛肾传代细胞、兔肾传代细胞-15、鸡胚成纤维细胞及鸡肾细胞)共培养,比较E.acervulina在原代细胞和传代细胞中的入侵及发育情况。【结果】37℃比41℃适宜进行E.acervulina的体外培养;5种细胞中,牛肾传代细胞入侵率最高;继续培养,牛肾传代细胞中E.acervulina可以形成第二代裂殖体,而非洲绿猴肾细胞、兔肾传代细胞-15只能发育到第一代裂殖体阶段,鸡胚成纤维原代细胞和鸡肾原代细胞中E.acervulina有第一代裂殖子的释放,但未再次入侵,并且鸡胚成纤维原代细胞和鸡肾原代细胞不易传代,5种细胞中,牛肾传代细胞最适宜E.acervulina培养;与牛肾传代细胞共培养1 h子孢子附着于细胞表面,2 h子孢子入侵,子孢子入侵后24 h形成第一代滋养体,52 h后形成第一代成熟裂殖体,60 h第一代裂殖子释放出细胞,72 h后形成第二代裂殖体。【结论】在非洲绿猴肾传代细胞、牛肾传代细胞、兔肾传代细胞-15、鸡胚成纤维原代细胞及鸡原代细胞这5种细胞中,牛肾传代细胞是培养E.acervulina的最适宜细胞,在其中可以发育到第二代成熟裂殖体。
- 王黎霞黄芳张建军安健
- 关键词：堆型艾美耳球虫子孢子体外培养细胞
- 堆型艾美耳球虫子孢子纯化被引量：3
- 2009年
- 笔者通过比较不同成分脱囊液的子孢子脱囊效果和不同蔗糖密度梯度分离纯化堆型艾美耳球虫子孢子的纯化效果来探索较佳的分离纯化堆型艾美耳球虫子孢子的条件。通过试验证明10%鸡胆汁+0.75%(W/V)胰酶脱囊效果最好。75%(W/V)和20%(W/V)蔗糖密度梯度离心得到的子孢子回收率最高,且纯度最好,染色证明纯化后的堆型艾美耳球虫子孢子仍具有较高的活性。
- 黄芳韦铮王黎霞安健
- 关键词：堆型艾美耳球虫梯度离心
