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宋丽云

作品数：10 被引量：22H指数：4
供职机构：中国农业科学院烟草研究所更多>>
发文基金：中国烟草总公司科技项目四川省烟草专卖局(公司)科技项目云南省烟草专卖局(公司)科技项目更多>>
相关领域：农业科学更多>>

合作作者

文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 10篇农业科学

主题

  • 5篇花叶
  • 5篇花叶病
  • 5篇花叶病毒
  • 3篇烟草
  • 3篇烟草花叶病
  • 3篇烟草花叶病毒
  • 3篇侵染
  • 3篇马铃薯
  • 3篇马铃薯Y病毒
  • 3篇TMV
  • 2篇黄瓜
  • 2篇黄瓜花叶病
  • 2篇黄瓜花叶病毒
  • 2篇过表达
  • 2篇N基因
  • 2篇CMV
  • 1篇毒株
  • 1篇蚜虫
  • 1篇亚组
  • 1篇烟区

机构

  • 10篇中国农业科学...
  • 4篇四川省烟草公...
  • 3篇云南省烟草公...
  • 2篇中国农业科学...
  • 1篇长江大学
  • 1篇中国烟草总公...
  • 1篇河南省烟草公...
  • 1篇潍坊职业学院
  • 1篇潍坊烟草有限...
  • 1篇山东中烟工业...
  • 1篇云南省烟草公...
  • 1篇北京海关
  • 1篇广西壮族自治...
  • 1篇湖北省烟草公...

作者

  • 10篇申莉莉
  • 10篇宋丽云
  • 8篇杨金广
  • 7篇王凤龙
  • 2篇李斌
  • 2篇钱玉梅
  • 1篇江连强
  • 1篇翟熙伦
  • 1篇王永
  • 1篇郭丛
  • 1篇战徊旭
  • 1篇刘东阳
  • 1篇王杰
  • 1篇李更新
  • 1篇王勇

传媒

  • 6篇中国烟草科学
  • 3篇中国农业科学
  • 1篇植物病理学报

年份

  • 2篇2023
  • 5篇2021
  • 1篇2020
  • 2篇2013
共 10 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
免疫捕捉real-time PCR对蚜虫中CMV检测体系的建立与应用
2013年
由黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)引起的病毒病是烟草上最主要的病害之一,高虫口密度的带毒蚜虫的迁入是烟草上CMV病害发生的主要致病因子。本研究结合当前CMV的两个检测体系——ELISA和real-time RT-PCR,通过CMV抗血清与带毒蚜虫研磨液中的病毒粒体结合反应,病毒复合体粘附在PCR管壁上,然后直接进行反转录反应,随后进行real-time PCR检测,建立了免疫捕捉real-time RT-PCR(Immunocapture real-time RT-PCR)检测单头蚜虫体内CMV的实时定量检测技术,与普通real-time RT-PCR和ELISA相比,灵敏性和特异性显著提高。该方法无需RNA提取等步骤,可以有效地减少样品操作过程的污染和蛋白、多糖以及酚类物质等杂质的影响,能够对微量CMV病毒粒体进行准确、快速、特异和灵敏的定量检测,对烟草病毒病的预测预报、无毒种苗的生产和病害防治都具有重要的科学意义。
宋丽云杨金广李锡宏宋玉川张长华战徊旭申莉莉钱玉梅王凤龙
关键词：PCR蚜虫
转录因子NbNAC062及其纳米药物对PVY侵染的抑制作用被引量：1
2023年
前期研究表明NbNAC062能够抑制PVY早期侵染,本研究通过构建NbNAC062敲除突变体和过表达植株进一步明确NbNAC062的抗病毒功能,并利用异硫氰酸荧光素(fluorescein-5-isothiocyanate,FITC)标记的壳聚糖季铵盐(chitosan quaternary ammonium salt,HACC)包被NbNAC062质粒,制备HACC-NbNAC062纳米药物。激光共聚焦显微镜对纳米药物进行示踪;透射电镜和激光粒子分析仪对其表征进行分析。通过GFP荧光差异、qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测病毒含量来探明纳米药物对PVY侵染的影响。结果显示,敲除组病毒GFP荧光增强,而过表达组病毒GFP荧光减弱,PVY CP含量与上述结果一致。纳米药物粒径集中分布在18~32 nm之间;Zeta电位为+41.8 mV。浸润纳米药物HACC-NbNAC062后48 h,在细胞内观察到FITC-HACC(绿色荧光)与RFP-NbNAC062(红色荧光);接种PVY-GFP后5、7、9 d,NbNAC062-HACC施药组的PVY CP mRNA水平较对照组分别下调17.41%、47.81%、13.03%;第7天施药组PVY CP蛋白水平明显低于对照组,病毒荧光强度显著暗于对照组。上述研究结果说明HACC-NbNAC062纳米药物成功递送了NbNAC062,并发挥了其对PVY初期侵染的抑制作用。
曲潇玲宋丽云张道顺丁程瀛沈广材张友臣张晓亮焦裕冰李莹杨金广申莉莉
关键词：马铃薯Y病毒过表达
毒株、苗龄及温度对烟草苗期接种TMV试验的影响被引量：4
2021年
病毒株系、苗龄、接种后培养条件是影响烟草病毒病发生发展的关键因素,为确保烟草接种TMV抗性鉴定和药效生测试验的准确性,在N基因烟草和普通烟草上接种TMV,采用病毒生物学、qRT-PCR和Western blot技术,研究病毒的分离纯化、株系、稀释限点、传导路径、病害症状,以及N基因抗TMV的温敏性。结果显示,TMV为U1株系,在K326上活体保存50~65 d,仍具有较强的致病力,稀释限点为10~5,接种物浓度以10~2稀释为宜。接种后TMV先由接种叶传导到主茎,向下至根、向上至心叶,然后是上部叶,最后传导至下部叶,12~16 d布满全株,21~28 d花叶畸形显著,病情调查宜在2~3周内。温度和苗龄影响N基因烟草对TMV的抗性反应,培养温度应在25℃~27℃,苗龄以6~7叶期为宜。
申莉莉贾海燕何青云俞芳菲龚明月曲潇玲宋丽云李莹杨金广王凤龙
关键词：烟草花叶病毒
恶臭假单胞菌发酵条件的研究被引量：4
2013年
从未发病的K326烟株根际土壤中筛选出对TMV具有高度拮抗活性菌株A3，发酵液的抑制效果可达95％以上，为此，从碳源、氮源、pH、温度、通气量及发酵时间等方面对该菌株的摇瓶发酵条件进行研究。结果表明，A3菌株发酵适宜温度为28℃，在该温度下发酵60～70h达到菌体最大数量，且抑菌效价最高；以葡萄糖为适宜的碳源可以更好的促进菌量的生长和抗病毒物质的分泌，有机氮中酵母膏或蛋白胨对菌株的生长和抗病毒活性成分生成均能达到理想的效果，鱼粉则不能被A3菌株很好的利用；pH7是菌株最适宜的发酵范围，偏酸不利于菌株的生长；适当加大通气量能更好地促进A3菌株的繁殖及抗病毒物质的分泌。
郭丛杨金广翟熙伦宋丽云申莉莉钱玉梅黄瑾王永李更新王凤龙
关键词：烟草TMV发酵条件
本氏烟NbNAC062的克隆及对马铃薯Y病毒侵染的抑制作用被引量：4
2021年
【目的】马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)是危害我国烟草生产的最重要病毒之一,NAC转录因子与植物的抗病、抗逆密切相关,本论文克隆NbNAC062进行生物信息学分析,并研究其在PVY侵染过程中的作用,为烟草抗病毒药剂的开发提供靶标。【方法】以本氏烟(Nicotiana benthamiana)为材料克隆NbNAC062,利用MEGA、UniProt、SMART、TMHMM Server 2.0、Sol Genomics Network、PlantCARE等技术进行生物信息学分析;利用激光共聚焦与实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)明确PVY侵染前后NbNAC062蛋白定位及mRNA表达量变化;基于病毒介导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)和过表达技术,构建pTRV::NbNAC062沉默载体与pEarleyGate100::RFP::NbNAC062过表达载体,采用qRT-PCR和Western blot检测NbNAC062在本氏烟中沉默与过表达后,PVY的积累量变化及未折叠蛋白应答(unfolded protein response,UPR)相关基因BiP的表达差异。【结果】NbNAC062编码646个氨基酸,N端28—179 aa为NAC结构域,129—185 aa为DNA结合区域,C末端621—643 aa为疏水跨膜结构,系统进化树与蛋白序列分析表明本氏烟NbNAC062与渐狭叶烟草NaNAC062亲缘关系最近。NbNAC062启动子中包含脱落酸、茉莉酸甲酯、水杨酸以及逆境响应相关的多种顺式作用元件。PVY侵染激活NbNAC062从细胞膜转移至细胞核,且诱导NbNAC062上调表达。PVY侵染本氏烟5、7 d,处理组NbNAC062 mRNA水平分别为对照组的2.52、1.95倍;PVY侵染3 d,BiP mRNA表达量为对照组的2.39倍,PVY侵染7 d,BiP表达量极显著低于对照组,下调表达56.77%。本氏烟沉默NbNAC062并接种PVY,接种后3、5、7 d,与对照组相比,沉默组PVY CP mRNA上调表达,分别为对照组的2.12、2.41、1.38倍,BiP mRNA表达量则下调,分别下调28.19%、58.11%、10.77%,接种后5、7 d沉默组PVY CP蛋白含量亦显著高于对照组。过表达NbNAC062并接种PVY,接种后24、48、72 h,与对照组相比,过表达组PVY CP mRNA分别下
曲潇玲焦裕冰罗健达宋丽云李莹申莉莉杨金广王凤龙
关键词：马铃薯Y病毒基因沉默
过表达和沉默NbRbcS基因对烟草主要病毒侵染的影响被引量：2
2021年
为明确Rubisco酶小亚基(Rubisco small subunit,RbcS)在烟草抵抗主要病毒侵染胁迫中的作用,以本氏烟为研究材料,利用qRT-PCR、Western blot和瞬时表达体系对烟草RbcS基因在TMV、CMV和PVY侵染中的调控作用进行系统分析。结果表明,3种病毒侵染本氏烟均引起NbRbcS在mRNA水平和蛋白水平上下调,瞬时过表达NbRbcS,病毒拷贝数均显著降低。而沉默NbRbcS,TMV、CMV和PVY拷贝数分别达到阴性对照的11.12、9.57和17.76倍。对PVY引起的斑驳叶片中深绿色和浅绿色区域分别进行qRT-PCR分析发现,在浅叶区NbRbcS mRNA的表达量只有深叶区的49.10%,但PVY的拷贝数却达到了深叶区的5.18倍。以上研究表明,RbcS大量表达可增强烟草对病毒的防御能力,烟草RbcS基因可作为潜在的抗病毒基因利用。
罗健达刘笑玮宋丽云李莹申莉莉卢燕回李永亮李斌王凤龙杨金广
关键词：烟草胁迫响应TMVCMVPVY
不同温度下TMV侵染枯斑三生烟的LncRNA差异表达被引量：4
2020年
【目的】筛选不同温度下烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)侵染后枯斑三生烟(Nicotiana tabacum var.Samsun NN)差异表达的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),研究lncRNA在枯斑三生烟抗性反应中的作用。【方法】N基因的温度敏感性使枯斑三生烟在25℃时具备对TMV的抗性、在31℃抗性丧失,在这两个温度条件下对枯斑三生烟接种TMV和磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffered saline,PBS),48 h后提取系统叶总RNA,构建链特异性文库后进行深度测序。对测序结果进行过滤后利用HTSeq将有效数据与近缘品种TN90(N.tabacum var.TN90)基因组比对,筛选得到lncRNA后利用FPKM法估计lncRNA的表达水平。通过edgeR筛选差异表达lncRNA(differentially expressed lncRNA,DElncRNA),并利用qRT-PCR技术对这一结果进行验证。通过共定位及共表达分析预测DElncRNA的靶基因,通过参考基因组注释、GO和KEGG富集分析研究靶基因的功能。【结果】4个处理共12个样本经lncRNA-seq各测得约8000万条clean reads,共获得4737条已知lncRNA、40169条新lncRNA。其中64个lncRNA在不同温度条件下TMV侵染后存在差异表达,qRT-PCR测定结果显示这些lncRNA的测序正确率在80%左右,表明本研究所得测序数据具备较高的可信度。对DElncRNA进行靶基因预测,发现一些基因同时被25℃下调和31℃上调的DElncRNA靶向。靶基因注释功能丰富,主要参与植物抗病、激素和代谢等生理过程。部分可能与激素通路相关的lncRNA,在25℃下TMV侵染时呈现下调趋势,而在31℃下TMV侵染则呈现上调趋势。GO富集分析显示靶基因主要参与构成膜、囊泡等组分,具备钙、钾离子通道抑制剂活性等分子功能,使相应离子得以转运引发随后的反应,同时也参与发病、抗原加工和呈现、细胞分裂素代谢等生理过程。KEGG分析发现靶基因显著富集在植物激素信号转导通路,25℃下调和31℃上调的DElncRNA靶基因同时富集在�
贾海燕宋丽云徐翔解屹张超群刘天波赵存孝申莉莉王杰李莹王凤龙杨金广
关键词：烟草花叶病毒N基因长链非编码RNA系统获得性抗性
青岛烟区马铃薯Y病毒株系鉴定及系统传导特性
2023年
为明确引起青岛试验田烟草脉坏死及花叶的PVY的发生规律、分子进化和系统传导特性,通过病毒病害表型,发病率和病情指数明确青岛试验田病毒病害流行规律;利用MEGA7构建系统发育树鉴定PVY青岛分离物的株系;通过q RT-PCR,western blotting和PVY-GFP荧光明确PVY侵染烟株的传导路径;通过不同叶位、不同症状病叶取样,利用q RT-PCR检测PVYCPm RNA相对含量,明确显症和隐症叶片的病毒含量差异,以及TMV、CMV、PVY单独、两者混合、三者混合侵染时的干扰或协生作用。结果显示:烟株成熟期,PVY与TMV和CMV混合发生严重,PVY分离物为N:O株系,未突破va基因抗性。在侵染早期,病毒从接种叶沿叶脉进入茎,开始双向运输时,先向根部移动,进而到达苗端;再扩散至上部叶,较慢移动至下部叶;最后伴随烟株生长持续向两端新生部位运输。侵染中期病株上部叶隐症现象显著,病叶症状与病毒浓度呈正相关。烟田中后期,PVY与TMV和CMV混合侵染,病毒间的干扰和协生作用导致症状复杂多变。研究结果有助于提高品种抗性鉴定试验的准确性和药效试验的靶标性。
郭光耀宋丽云江连强江连强张富强董文凤何青云申莉莉
关键词：马铃薯Y病毒株系鉴定隐症混合侵染
高效靶向降解烟草花叶病毒核酸的dsRNA筛选与大量制备被引量：1
2021年
【目的】筛选高效靶向降解烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)的dsRNA,实现其大量制备,并探究其作用机制。【方法】以TMV编码的CP、MP、RdRP功能基因为靶序列,体外转录合成相应的dsRNA,浸润本氏烟(Nicotiana benthamiana),24 h后接种TMV,于接毒后2、3 d取样提取总RNA和蛋白质,以CP基因mRNA水平和蛋白水平为指标,结合TMV病毒生物学症状,综合评价各dsRNA对TMV的抑制效果。同时结合侵染性克隆TMV-30B在本氏烟烟株上的荧光表达现象和TMV在三生烟(Nicotiana tabacum var. Samsun NN)上的过敏性坏死反应(hypersensitive necrosis reaction),通过比较TMV基因组上6个靶序列相对应的dsRNA,筛选出高效抑制TMV的dsRNA片段。为了获取大量的dsRNA,将dsRNA对应的基因片段插入到原核表达载体L4440的双T7启动子之间,转化至RNase III缺陷型大肠杆菌(Escherichia coli)HT115(DE3)中,并对原核表达制备的dsRNA喷施烟草后生成的siRNA进行深度测序,比较外源施用dsRNA后,对TMV侵染的small RNA表达特征和富集带的影响。【结果】筛选出高效影响TMV CP基因表达的dsRNA RdRP1461-1774,并构建了可诱导形成目的 dsRNA的原核表达载体L4440-dsRdRP1461-1774,可在DE3中大量制备RdRP1461-1774的dsRNA,菌液中提取的dsRNA喷施于烟草上对TMV的防治效果显著。TMV-30B侵染本氏烟时荧光数量减少,并能够延长叶片萎蔫时间,在三生烟上施用时叶片枯斑数量明显减少。小RNA测序结果显示TMV侵染引起的RNAi过程中正义链和反义链以大致相等的频率产生siRNA,而外源性dsRNA的浸润会引起靶向区域siRNA的富集,siRNA反义链累积量骤增,对应的正义链累积量骤减,外源dsRNA的施用能够引起siRNA表达丰度的变化。【结论】通过比较dsRNA介导植物靶向抗TMV侵染的效果来筛选抗烟草花叶病毒的dsRNA序列,最终选定TMV RdRP基因上一段长313 bp的高效作用片段,该片段dsRNA能够高效与靶基因结合,降低染病�
徐翔解屹宋丽云申莉莉李莹王勇刘明宏刘东阳王小彦赵存孝王凤龙杨金广
关键词：烟草花叶病毒RNA干扰DSRNA原核表达
烟草黄瓜花叶病毒亚组Ⅰ分离物生物学特性被引量：5
2021年
对引起花叶狭长及疱斑畸形重症的烟草黄瓜花叶病毒,采用生物学接种、CP基因扩增测序、电镜观察、免疫印迹、荧光定量等方法,研究病毒分离物的株系、粒体形态、致病力、稀释限点、传导路径以及在抗感烟草上的症状。结果显示,分离物外壳蛋白基因长度为657 bp,其核苷酸序列与亚组Ⅱ的代表Q株系同源性为69.83%,与亚组Ⅰ的代表Fny株系同源性为93.00%,介于ⅠA与ⅠB株系之间。病毒粒体球形,直径28~30 nm,对烟草致病力强。病汁液稀释限点为10-5,质量浓度40倍稀释接种后病毒由接种叶移动到主茎后,先向下至根、向上至心叶,再扩散布满全株,最后集中在上部叶。亮黄和G28对其表现高感,病叶狭窄、黄化斑驳、变薄革质化及疱斑畸形;Ti245和铁耙子表现中抗,病叶轻微脉明斑驳。
申莉莉宋丽云龚明月何青云宋青松王宝剑刘文涛李斌王玉洁蔺忠龙
关键词：烟草黄瓜花叶病毒生物学特性
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