缪芬芳
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
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- 反向疫苗学在猪病疫苗研究中的应用被引量：4
- 2011年
- 反向疫苗学是通过对病原基因组测序和计算机预测,筛选出可能编码疫苗抗原的基因,通过高通量克隆、表达纯化技术及免疫原性的检测,制备具有保护力的疫苗,为传统方法无法制备疫苗的病原微生物提供了一种新的研究思路与方法。本文介绍了反向疫苗学的基本流程,并对近几年反向疫苗学在猪病病原微生物方面的研究进展进行了综述。
- 缪芬芳白方方王海燕刘茂军熊祺琰冯志新邵国青
- 关键词：基因组病原微生物
- 猪肺炎支原体DnaK基因的表达及ELISA方法建立被引量：8
- 2011年
- 猪肺炎支原体(Mhp)是猪气喘病的主要病原体。利用Mhp NJ株的DnaK基因通过SOE-PC(splicing withoverlap extension PCR)R扩增和突变,获得了目的片段并插入表达载体pET-28a(+)中,然后转入宿主菌BL21(DE3)。重组质粒经1 mmol/L IPTG在37°C温度下诱导5 h,目的蛋白可达到总蛋白的14.1%。Western Blotting证明表达的重组蛋白具有猪肺炎支原体反应原性,用该重组蛋白建立的ELISA方法可检测到猪肺炎支原体抗体。此为该病基因工程疫苗抗原的筛选和ELISA诊断试剂盒的研制奠定基础。
- 刘茂军丁志勇刘冬霞杜海霞缪芬芳甘源孔猛冯志新熊祺琰白方方杜改梅邵国青
- 关键词：猪肺炎支原体DNAK重组蛋白活性鉴定
- 猪附红细胞体MSG1蛋白的表达和多克隆抗体的制备被引量：4
- 2010年
- 本研究将附红细胞体的MSG1蛋白基因按大肠杆菌密码子偏嗜性改造后进行全基因人工合成,合成的基因连接入pBAD/HisB载体后导入大肠杆菌Top10感受态细胞中,进行MSG1诱导表达,确定诱导表达的最佳时间和最佳诱导剂浓度。对表达的蛋白应用His单抗进行了特异性鉴定,对鉴定后的蛋白应用Ni-NTA纯化试剂进行了不同条件下的蛋白纯化。试验结果表明,诱导蛋白的分子量在45 ku左右,加入0.2%的L-阿拉伯糖,诱导2 h后所表达的蛋白量最高。经Western-blot鉴定,该蛋白可以被His单抗特异性识别,经纯化后可以得到较高纯度的MSG1蛋白。表达的MSG1蛋白经纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot证明制备的抗体具有高度的特异性。MSG1蛋白的表达和多抗的制备可以为后续研究附红细胞体的吸附机制、致病机理,以及附红细胞体病的治疗等提供理论基础。
- 缪芬芳刘明亚李玉峰陈闻许家荣王先炜姜平
- 关键词：附红细胞体多克隆抗体制备
- 猪肺炎支原体DnaK蛋白质单抗的制备与鉴定被引量：1
- 2012年
- 为了获得针对猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)DnaK蛋白质的单克隆抗体,利用Mhp全菌抗原免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备Mhp DnaK蛋白质的单抗。获得了3株可稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3A8、3E2及5D10。3株单抗的Ig重链均为IgG1,轻链均为κ链。Western Blot分析结果显示,3A8与猪鼻支原体和Mhp均有反应,3E2和5D10只与Mhp反应,同时3E2和5D10能与Mhp 168株105代、J株、临床分离株XLW-1、XLW-2、XLW-3、XLW-4、AH、WX产生特异性反应。采用间接ELISA测得3株单抗腹水与DnaK重组蛋白质及Mhp 168全菌蛋白质反应效价均为1∶1 000 000。单抗3A8为针对Mhp和猪鼻支原体(Mycoplasmahyorhinitis,Mhr)共同抗原表位的单抗;3E2和5D10为猪肺炎支原体特异性抗体,且抗体效价高。
- 缪芬芳王海燕白昀刘茂军冯志新熊祺琰白方方邵国青
- 关键词：猪肺炎支原体单克隆抗体
- 猪肺炎支原体168株特异性单抗的制备及鉴定
- 2012年
- 将猪肺炎支原体168株全菌蛋白免疫小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,3次亚克隆后,获得了4株针对168株全菌蛋白的单抗,分别将其命名为2F5、2G7、4F5、5E9。Western-blot检测结果表明,2G7、4F5与猪肺炎支原体具有特异性反应条带,不与猪鼻支原体、大肠杆菌反应。亚型鉴定结果表明,两株特异性单抗(2G7、4F5)的亚型属IgG1,轻链为κ型,2F5、5E9亚型属IgG2a,轻链为κ型。间接免疫荧光结果表明,4株单抗均与猪肺炎支原体168株有特异性荧光反应,特异性单抗的获得为猪肺炎支原体的检测及机理研究奠定基础。
- 王海燕缪芬芳冯志新刘茂军邵国青
- 关键词：猪肺炎支原体单克隆抗体间接免疫荧光
