刘晓燕
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
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- 鹅坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ的原核表达及免疫原性鉴定被引量：2
- 2014年
- 【目的】明确鹅坦布苏病毒(GTUMV)E蛋白结构域I的原核表达及免疫原性,为进一步研究GTMUV E蛋白结构的生物学特性、免疫学功能等奠定基础。【方法】通过人工合成方法获得GTMUV E蛋白结构域I的编码基因(EI基因),并与携带GST标签的p GEX-4t-1载体连接,转入大肠杆菌后经诱导表达获得融合蛋白,并以Western blotting鉴定融合蛋白是否有免疫原性。【结果】合成获得的E1基因片段为411 bp,将其插入p GEX-4t-1载体可构建重组表达质粒p GEX-4t-1-EI。阳性重组菌经1 mmol/L IPTG诱导5 h后,融合蛋白的表达量达最高峰,且以包涵体形式存在,分子量约41.0 k Da。Western blotting鉴定结果显示,融合蛋白与GST标签抗体和E蛋白阳性血清均可发生特异性反应,检测到预期的目的条带。【结论】GTMUV E蛋白结构域I可在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白具有良好的免疫原性,可用于GTMUV血清学检测试剂盒的研发。
- 赵冬敏黄欣梅刘宇卓韩凯凯杨婧谢星星刘晓燕李银
- 关键词：E蛋白原核表达免疫原性
- 鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域I和Ⅱ在大肠杆菌中的表达及鉴定被引量：1
- 2014年
- 为了实现鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域I和II在大肠杆菌中的表达。利用PCR方法扩增得到目的片段,并引入FLAG标签序列(DYKDDDDK),构建重组表达质粒pET28a-E-I/II。转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达目的蛋白质,并对其进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果显示,PCR扩增得到约900 bp的目的片段,经鉴定成功构建重组表达载体pET28a-E-I/II。重组菌在IPTG诱导4 h后在37 000处出现目的蛋白质并且表达量达到高峰。经超声波破碎后SDS-PAGE分析显示,融合蛋白质以包涵体形式存在。Western-blot结果显示,重组蛋白质与FLAG单抗和E蛋白质阳性血清均可发生特异性反应。表明鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域Ⅰ和Ⅱ在大肠杆菌中成功表达,经鉴定重组蛋白质具有良好的免疫反应性。
- 赵冬敏黄欣梅刘宇卓韩凯凯谢星星刘晓燕李银
- 关键词：大肠杆菌DOMAINS
- 坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ/Ⅱ蛋白抑制病毒感染的研究
- 引言 鹅坦布苏病毒(GTMUV)属于黄病毒科、黄病毒属，给我国鸭鹅养殖业造成了重大经济损失.病毒囊膜蛋白E (E蛋白)是黄病毒属病毒表面最重要的结构蛋白，在空间上形成3个不同的结构域(Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ).E蛋白在吸附宿主、与宿...
- 赵冬敏黄欣梅刘宇卓韩凯凯杨婧谢星星刘晓燕李银
- 鹅坦布苏病毒E蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域和FLAG标签的融合表达
- 利用PCR 方法扩增得到目的片段，并引入FLAG 标签序列(DYKDDDDK)，构建重组表达质粒pET28a-E-I/II.转化至BL21(DE3)中，经IPTG 诱导表达目的蛋白质，并对其进行SDS-PAGE 分析和W...
- 赵冬敏黄欣梅刘宇卓韩凯凯谢星星刘晓燕李银
- 鹅坦布苏病毒囊膜蛋白结构域Ⅱ在大肠杆菌中的表达及免疫学鉴定被引量：2
- 2015年
- 为了实现鹅坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)结构域Ⅱ在大肠杆菌中的表达并对其进行免疫学鉴定,根据鹅坦布苏病毒JS804株囊膜蛋白基因序列,利用人工合成法获得鹅坦布苏病毒囊膜蛋白结构域Ⅱ编码基因并引入限制性酶切位点,片段大小为507 bp。将合成的基因片段克隆入pGEX-4t-1原核表达载体中,构建重组表达载体pGEX-EII并转化至BL21(DE3)中。通过优化表达条件获得重组蛋白质并进行免疫学鉴定。结果显示,重组蛋白质分子量约为4.4×104,Western-blot和间接免疫荧光检测结果表明重组蛋白质具有良好的免疫原性。
- 赵冬敏黄欣梅刘宇卓韩凯凯杨婧谢星星刘晓燕李银
- 关键词：囊膜蛋白
