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化晓莉
作品数:
1
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供职机构:
苏州大学医学部医学生物技术研究所
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发文基金:
国家自然科学基金
国家高技术研究发展计划
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
黎燕
军事医学科学院基础医学研究所
张学光
苏州大学医学部医学生物技术研究...
乔春霞
军事医学科学院基础医学研究所
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乔春霞
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2010
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抗人CD40功能性嵌合抗体的制备及其高效表达
2010年
目的构建抗CD40嵌合抗体的真核表达载体,实现在真核细胞中的高效表达。方法采用RT-PCR法,从分泌鼠源抗人CD40抗体的杂交瘤细胞系5C11中钓取其轻、重链基因,进行序列测定。将5C11轻重链可变区基因分别克隆入表达载体pCMV-VH和pCMV-VL,构建成嵌合抗体(c5C11)的轻链真核表达载体5C11L-pCMV及重链真核表达载体5C11H-pCMV。将嵌合抗体的轻重链真核表达载体共转染入293T细胞,利用夹心ELISA法测定上清中c5C11的浓度,通过流式细胞术检测c5C11与膜抗原的特异性结合。通过生物信息学相关方法对c5C11的氨基酸序列进行合理改造,尝试在保持生物学功能的基础上提高c5C11的表达量。结果成功钓取鼠源单抗5C11的轻重链可变区基因并构建了真核表达载体,实现了c5C11的分泌表达;嵌合抗体较好地保留了鼠源母本抗体的抗原识别能力。利用计算机辅助设计,一定程度上提高了c5C11的表达量。结论为后续研究嵌合抗CD40抗体对B淋巴瘤等肿瘤的治疗提供了一定的依据。
化晓莉
乔春霞
黎燕
张学光
关键词:
CD40
杂交瘤
嵌合抗体
真核表达
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