李建涛
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- 雷帕霉素对大鼠血管平滑肌细胞起始识别复合物1 mRNA表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的观察血管平滑肌细胞(VSMC)起始识别复合物1(ORC1)mRNA在雷帕霉素作用下的表达变化。方法采用组织块贴壁法获得VSMC并用免疫细胞化学法鉴定,含体积分数10%血清的培养基培养。血清饥饿法饥饿细胞24 h使其同步化。将雷帕霉素加入含体积分数10%血清的培养基(终浓度为10 nmol.L-1)中继续培养细胞,分别于0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、15 h、18 h、21 h、24 h收集细胞,采用反转录-聚合酶链反应技术法检测各时间点ORC1 mRNA的表达(内参为β-actin)。用Quantity One软件计算各时间点ORC1 mRNA与内参的光密度比值,并作统计学分析。结果各时间点ORC1与β-actin光密度比值均有显著性差异(F=410.170,P=0.001)。雷帕霉素作用3～12 h ORC1 mRNA的表达持续升高(与0 h比较,P<0.05),12～18 h逐渐下降(与0 h比较,P依次为0.001,0.001,1.000),18～24 h与0 h比较,无统计学差异(P依次为1.000,0.986,1.000)。结论VSMC的ORC1 mRNA表达随雷帕霉素作用时间呈动态变化。
- 王倩舒茂琴江明宏覃跃龙李建涛
- 关键词：雷帕霉素血管平滑肌细胞
- 体外培养血管平滑肌细胞的同步方法被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨体外血管平滑肌细胞(VSMC)同步化的培养及意义。方法:采用组织块贴片法原代培养大鼠胸主动脉VSMC,利用双胸苷阻断和秋水仙素阻抑法使VSMC达到细胞周期同步化。结果:经鉴定培养的细胞为VSMC,采用血清饥饿法、双胸苷阻断法和秋水仙素阻抑法分别获得了处于不同细胞周期的同步化的VSMC:G0/G1期(89·22±3·54)%,G1/S交界期(66·74±7·16)%,S期(63·24±4·06)%,G2/M期(51·64±11·18)%。结论:同步了体外培养的VSMC,为研究冠状动脉粥样硬化的发病机制奠定了实验基础。
- 江明宏舒茂琴王倩覃跃龙李建涛曹雪滨
- 关键词：血管平滑肌细胞细胞周期同步化
- 改良组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定被引量：5
- 2007年
- 目的以简捷、高效的方法获取原代和传代的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),为进一步的科学研究提供实验材料。方法采用改良的组织块贴壁法培养原代大鼠VSMC,2.5 g.L-1胰蛋白酶消化传代,并用相差显微镜、电镜、荧光显微镜及激光共聚焦显微镜对细胞进行鉴定。结果95%的组织块接种成活,相差显微镜下细胞呈典型的"峰-谷"状生长,胞体长梭形;电镜下可见粗、细肌丝沿细胞长轴平行排列;荧光显微镜及激光共聚焦显微镜检测α-肌动蛋白可见细胞胞浆内呈阳性显色,细胞核不显色。结论本方法培养VSMC简便、易操作,获得的细胞纯度和成活率较高。
- 王倩舒茂琴江明宏李建涛康振峻
- 关键词：血管平滑肌细胞细胞培养主动脉
- ORC1基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞表型的影响被引量：2
- 2009年
- 目的以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)ORC1基因,探讨ORC1基因表达抑制后对VSMCs表型的影响。方法实验设置正常对照组、阴性siRNA组及阳性siRNA组。应用Western blot检测ORC1基因表达的变化;免疫荧光染色后激光共聚焦显微镜观察细胞形态结构;应用流式细胞仪检测细胞表型标志蛋白表达。结果①siRNA转染后,阳性siRNA组ORC1基因表达水显著降低,而正常对照组及阴性siRNA组间ORC1基因表达水平无显著差异。②siRNA转染后,阳性转染组细胞呈现收缩型形态特征,空白对照组及阴性对照组细胞呈现合成型形态特征。③siRNA转染使ORC1表达减弱后,VSMCs收缩型标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SM actin)和平滑肌肌动蛋白重链2(SM-2)表达水平明显升高,合成型标志物骨桥蛋白(osteopontin)表达水平明显降低,空白对照组及阴性对照组间3种标志物表达水平无显著差异。结论RNA干扰介导的ORC1基因沉寂可促使VSMCs由合成型向收缩型转化。
- 李建涛舒茂琴冯媛媛
- 关键词：RNA干扰血管平滑肌细胞表型
