欧全宾
- 作品数：6 被引量：27H指数：4
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：山东省科技发展计划项目国家现代农业产业技术体系建设项目国家水禽产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 1株B亚型禽偏肺病毒的分离与鉴定被引量：8
- 2014年
- 从山东省多个地区的商品肉鸡养殖场采集64份疑似病料，通过RT—PCR方法检测出37份禽偏肺病毒阳性病料，以此作为病毒分离材料接种SPF鸡胚，盲传至第7代时鸡胚生长明显迟滞。取阳性尿囊液在CEF中培养，呈现禽偏肺病毒典型细胞病变（CPE）：细胞变圆、悬浮，有合胞体形成。将分离株接种于Veto细胞及DF-1细胞均出现类似病变。对分离株F基因进行测序，并与GenBank中发表的部分代表序列比较。结果显示，与B亚型禽偏肺病毒的核苷酸同源性最高，为97．4％～99．3％；与A亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性较低，为77．4％～78．1％；而与C亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性最低，为69．5％～69．7％。基因分型显示分离株为B亚型禽偏肺病毒，将该毒株命名为禽偏肺病毒SDWF株。
- 薛聪唐熠陈琳崔京腾欧全宾孙晓艳裴苹苹刁有祥
- B亚型禽偏肺病毒重组G蛋白间接ELISA方法的建立及应用被引量：4
- 2013年
- 以纯化的B亚型禽偏肺病毒(aMPV)疫苗株(VIR-115B)重组G蛋白作为包被抗原,对各项条件进行优化,确定判定标准,建立检测B亚型aMPV抗体的间接ELISA方法。将构建好的重组质粒转入Rosetta(DE3)感受态细胞进行诱导表达,获得重组G蛋白。利用亲和层析法对表达产物进行纯化,并用Western-blotting对表达产物进行鉴定。以纯化后的重组G蛋白作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测B亚型aMPV抗体的间接ELISA诊断方法。结果显示,成功表达并纯化了B亚型aMPV疫苗株(VIR-115B)重组G蛋白,Western-blotting检测结果证明表达产物具有良好的反应原性。以重组G蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。交叉试验结果表明重组G蛋白与新城疫、禽流感(H9N2)、传染性支气管炎和传染性法氏囊阳性血清均不发生交叉反应。该方法与法国IDEXX公司生产的aMPV抗体检测试剂盒符合率为96.0%。采用本试验建立的间接ELISA方法对山东省7个地区鸡场的1 139份鸡血清进行了检测,结果表明,山东省部分地区aMPV的抗体阳性率为37.05%。本试验建立的间接ELISA方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,利用该方法初步证实山东省部分地区存在aMPV感染现象。这一研究为aMPV诊断试剂盒的研制奠定了基础,并为该病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段。
- 陈琳刁有祥邹金峰唐熠程彦丽欧全宾薛聪崔京腾鞠小军孙晓艳裴萍萍
- 关键词：B亚型间接ELISA
- 鸭源新城疫病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 为制备鸭源新城疫病毒(NDV)的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的鸭源NDV的核衣壳蛋白(NP)为免疫原,免疫6周龄～8周龄的BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术,经以重组蛋白为包被抗原的间接ELISA方法筛选,获得了2株能稳定分泌抗重组蛋白MAb的杂交瘤细胞株A1和B2,经ELISA检测A1株和B2株细胞上清效价均为212,诱生的腹水的效价分别为107和106。Western blot和IFA检测显示,仅A1株能与鸭源NDV NP蛋白发生特异性反应。抗鸭源NDV NP蛋白MAb的研制,为鸭源NDV的免疫学诊断及致病机理的研究奠定基础。
- 程彦丽刁有祥欧全宾杨建朋张坤国纪垒肖坡
- 关键词：鸭源新城疫病毒核衣壳蛋白单克隆抗体
- 鸭坦布苏病毒E基因环介导等温扩增检测方法的建立与应用被引量：10
- 2013年
- 根据GenBank发布的坦布苏病毒Bagaza毒株E基因的保守序列设计1套引物,建立了环介导等温扩增快速检测鸭坦布苏病毒的方法。该检测方法的敏感性可达10拷贝/μL;对鸭坦布苏病毒山东分离株的检测呈阳性,而对鸭瘟病毒、禽流感病毒(H9亚型)、鸭新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒扩增结果均为阴性;应用该方法对山东省各地采集的82份疑似病料进行检测,可检出72份阳性。表明本试验所建立的环介导等温扩增检测方法灵敏性高、特异性强、操作简便快速,可用于鸭坦布苏病毒病的临床诊断和流行病学调查。
- 欧全宾刁有祥唐熠高绪慧于春梅
- 关键词：E基因环介导等温扩增荧光染料
- 禽偏肺病毒乳胶凝集试验检测方法的建立与应用被引量：2
- 2014年
- 【目的】建立禽偏肺病毒乳胶凝集试验检测方法,以快速、有效、准确地检测该病毒。【方法】用制备的禽偏肺病毒抗体致敏乳胶,与禽偏肺病毒反应,优化最佳致敏条件,建立禽偏肺病毒乳胶凝集试验检测方法;对该方法的重复性与特异性进行检测,将该方法与套式RT-PCR进行比较,并将其用于临床病料的检测。【结果】禽偏肺病毒抗体致敏乳胶的最佳致敏温度为56℃,抗体最佳稀释度为1∶10(体积比),最佳致敏时间为120min。用建立的乳胶凝集试验检测方法和套式RT-PCR同步检测10份禽偏肺病毒尿囊液,两者的阳性检出率一致,总符合率为100%。应用该方法对采自山东省不同地区的68份可疑临床病料进行检测,阳性检出率为26.47%。【结论】建立了禽偏肺病毒乳胶凝集试验检测方法,该法具有快速、简便、准确、特异性强、重复性和稳定性良好等优点,是一种适于基层单位检测禽偏肺病毒的可靠方法。
- 裴苹苹刁有祥孙晓艳王蛟欧全宾
- 关键词：乳胶凝集试验
- B亚型禽偏肺病毒逆转录套式PCR检测方法的建立与应用被引量：6
- 2013年
- 根据GenBank发布的B亚型禽偏肺病毒Fusion(F)基因的保守序列设计2对引物,建立了一种适用于B亚型禽偏肺病毒的逆转录套式PCR检测方法。采用该方法对B亚型禽偏肺病毒山东分离株进行检测,可以特异性地扩增出415bp的目的片段。此方法具有高度特异性和敏感性,以H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒作为模板进行扩增,结果均为阴性。经检测,该方法第1次PCR扩增的敏感性为107copies/μL,第2次扩增的敏感性为102copies/μL,第2次扩增敏感性比第1次高105倍。应用本方法对采自山东省不同地区的64份可疑临床病料进行检测,最终从64份疑似病料中检测出37份为阳性。结果表明,所建立的套式PCR检测方法具有特异、敏感、实用等优点,为B亚型禽偏肺病毒的快速诊断以及深入研究奠定了基础。
- 薛聪刁有祥唐熠陈琳鞠小军崔京腾欧全宾
- 关键词：F基因
