李永燕
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：宁波市第二医院更多>>
- 发文基金：宁波市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向HBx小干扰RNA表达载体构建及其功能探讨被引量：1
- 2011年
- 目的:设计和构建乙型肝炎病毒(HBV)X基因(HBx)特异性的小干扰RNA(siRNA)体内表达载体,筛选抑制X基因表达的有效siRNA,并初步探讨其对HBV复制功能的影响。方法:以X基因为目的基因,以产生siRNA质粒载体pSilencerTM-U6为表达模板,细胞内转录合成3条siRNA,并构建携带荧光素酶报告基因的重组质粒载体plucF-HBx。将重组质粒载体plucF-HBx与产生siRNA的质粒pSilencerTM-U6共转染HepG2细胞,检测荧光素酶活性以筛选出抑制荧光素酶表达的有效siRNA,逆转录聚合酶链反应检测HBx mRNA的表达,进一步证实siRNA对HBx表达的抑制效果,然后将siRNA转染HepG2.2.15,酶联免疫吸附法和荧光定量PCR检测siRNA对HBV复制的影响。结果:合成的3条siRNA中有1条抑制荧光素酶表达,抑制效率为76.3%,并能特异性抑制HBV的复制。结论:成功构建并筛选到针对X基因表达的有效siRNA质粒,为HBV的基因治疗奠定基础。
- 高国生翁彭剑纪礽斌李德周李永燕李红山丁世雄
- 关键词：RNA干扰SIRNA基因治疗
- 痉挛性截瘫蛋白21对乙型肝炎病毒复制的影响及其机制被引量：2
- 2011年
- 目的 探讨人痉挛性截瘫蛋白21（SPG21）对乙型肝炎病毒（HBV）复制的影响，并探讨其调节机制。方法将HBV感染性克隆pHBV1．3及其启动子pHBV—Luc分别转染HepG2细胞，加入不同浓度的SPG21蛋白，采用酶联免疫吸附法检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg含量；RT—PCR和Westernblot法检测IlepG2细胞内HBV核心蛋白mRNA和蛋白表达；荧光定量PCR法检测细胞闭合环状DNA（cccDNA）的水平；采用Luminometer荧光检测仪分析HBV启动子活性的变化。实验数据用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验。结果SPG21能够上调细胞上清液中HBsAg和HBeAg的含量，同时能够促进细胞内HBV核心蛋白的表达和HBVcccDNA的产生，并上调HBV启动子活性，其调节作用呈剂量依赖效应；与对照组比较，加入50μg／ml，100μg／ml，200μg／mlSPG21蛋白48h后，HBV启动子上调倍数分别为1．63、3．09和4．66（P〈0．05）。结论SPG21能够促进HBV在HepG2细胞中的复制。
- 高国生翁彭剑李永燕丁世雄
- F12基因复合杂合变异致遗传性FⅫ缺陷症一个家系的遗传学分析
- 2023年
- 目的对1个遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系进行实验室表型和基因变异分析,初步探讨其分子发病机制。方法选取2021年7月17日因"慢性胃炎"就诊于宁波市第二医院的1例遗传性FⅫ缺陷症男性先证者及其家系成员(共3代7人)作为研究对象。检测先证者及其家系成员凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)、凝血因子Ⅸ活性(FⅨ:C)、凝血因子Ⅺ活性(FⅪ:C)、FⅫ活性(FⅫ:C)和FⅫ抗原(FⅫ:Ag)等指标以明确诊断。采用DNA直接测序分析F12基因的所有外显子、侧翼、5′和3′非翻译区及家系成员相应的变异位点区域,用克隆测序进一步证实所发生的变异。用生物信息学软件分析变异对蛋白功能的影响。结果先证者为47岁男性,APTT为180.0 s,明显延长,FⅫ:C和FⅫ:Ag均<1.0%,极度降低。先证者父亲、母亲、弟弟、大儿子及小儿子FⅫ:C和FⅫ:Ag均有不同程度降低。基因分析显示先证者F12基因第10外显子存在c.1092_1093insC(p.Lys365Glnfs*69)杂合插入变异及第14外显子存在c.1792_1796delGTCTA(p.Val579Hisfs*32)杂合缺失变异,c.1092_1093insC为已报道的致病性变异。其母亲和大儿子携带c.1092_1093insC杂合插入变异,父亲、弟弟和小儿子携带c.1792_1796delGTCTA杂合缺失变异。第1外显子启动子区46C/T多态性分析显示先证者、大儿子和小儿子为46T/T型,其余人均为46C/T型。生物信息学软件分析第579位氨基酸残基为高度保守的位点,变异后增加了一个苯环及周围氨基酸的氢键发生了改变。根据美国医学遗传学与基因组学学会相关遗传变异分类标准和指南,c.1792_1796delGTCTA变异评级为致病性变异(PVS1+PM2_Supporting+PM4)。结论F12基因母源的c.1092_1093insC(p.Lys365Glnfs*69)杂合插入变异及父源的c.1792_1796delGTCTA(p.Val579Hisfs*32)杂合缺失变异可能是该家系FⅫ水平降低的原因。上述发现丰富了FⅫ缺乏症的基�
- 叶佳佳李永燕周静珍杨雅芸冯伟云
- 关键词：基因变异家系
