杨玉霞
- 作品数：4 被引量：19H指数：2
- 供职机构：南京农业大学园艺学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 蝴蝶兰全长cDNA文库构建及F3′H基因克隆被引量：12
- 2013年
- 以红色蝴蝶兰为材料,利用SMARTer技术构建蝴蝶兰全长cDNA文库,分析从文库中获得的EST序列,获得蝴蝶兰类黄酮3′羟化酶基因(PhF3′H)的全长,并对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR方法,研究PhF3′H基因在红色蝴蝶兰和黄色蝴蝶兰花瓣中的表达情况。结果表明:(1)从构建的蝴蝶兰文库中随机挑选24个单克隆进行测序,结果显示均含有插入片段,重组率为100.0%,其中扩增片段长度在750bp以上的克隆有22个,占91.7%。(2)获得的PhF3′H基因编码的氨基酸序列与大丽花(Dahlia pinnata,ADB_77826.1)、毛油点草(Tricyrtis hirta,BAH_22519.1)等多种观赏植物F3′H编码的氨基酸序列均具有较高的一致性。(3)实时荧光定量PCR检测结果显示,PhF3′H在红色蝴蝶兰中的表达量大约是黄色蝴蝶兰的19倍,说明该基因对蝴蝶兰花青素苷的积累有重要影响。该研究结果为蝴蝶兰新基因的挖掘及花色育种奠定了理论基础。
- 杨玉霞孙菲菲张昌伟
- 关键词：CDNA文库RT-PCR
- SMARTer技术构建辣椒黄绿苗突变体叶片全长cDNA文库被引量：4
- 2013年
- 本研究以辣椒黄绿苗嫩叶为材料,提取总RNA,采用LD-PCR技术合成First-strand cDNA和ds cDNA。将分级纯化后的ds cDNA连接到载体pSMART2IFD上,用电穿孔法将重组子转化到大肠杆菌感受态细胞DH5α中,构建辣椒全长cDNA文库。文库质量检测结果显示:原始文库滴度为1.76×106PFU/ml,重组率为94%,插入片段长度为500～2 000 bp,平均长度为1 170 bp,表明构建的辣椒叶片cDNA文库较为理想,可用于目的基因筛选。
- 马志虎孙国胜张昌伟杨玉霞潘跃平
- 关键词：辣椒黄绿苗突变体CDNA文库
- 建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒RdRp基因hpRNAi表达载体的构建被引量：2
- 2013年
- 为了构建建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)复制酶RdRp基因hpRNAi的表达载体,根据GenBank中CymMV和ORSV RdRp基因的保守序列设计引物,以蝴蝶兰温室生产中两种病毒的分离物为模板,成功扩增了两种病毒的RdRp基因片段。扩增的这两种病毒的RdRp基因与数据库中病毒序列同源性均在98%以上。利用融合PCR将两种病毒片段串联在一起,然后通过Gateway技术的BP反应和LR反应将融合产物插入到基因沉默表达载体pHellsgate12中,成功构建了可同时抗建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的发夹结构RNA干扰载体,为兰花多抗基因工程育种奠定了基础。
- 杨玉霞言燕华韦武青马志虎李倩中李淑顺张昌伟
- 关键词：建兰花叶病毒齿兰环斑病毒抗病毒病RNA干扰
- 蕙兰CfCIN基因克隆及其功能分析被引量：2
- 2016年
- 以蕙兰(Cymbidium faberi Rolfe)为试验材料,采用RT-PCR技术克隆了TCP家族的CIN同源基因,开放阅读框长1 161bp,编码386个氨基酸,将其命名为CfCIN(GenBank登录号为KJ956809)。为进一步分析CfCIN的功能,构建了植物表达载体,采用农杆菌介导法转化非洲紫罗兰叶片,获得了转化植株并对转基因植株进行了性状分析。结果显示:与野生型非洲紫罗兰叶片相比,转基因植株的叶片更大,由圆形变为卵圆形,叶缘由平整光滑变为有缺刻且稍向后卷曲,叶脉明显,叶柄红,花器官形状变化不明显。研究表明,CfCIN可能参与调控植物叶片的形态建成。
- 李玉霞杨玉霞孙玉英刘松王广东
- 关键词：蕙兰基因克隆非洲紫罗兰
