杨广宇
- 作品数：79 被引量：40H指数：4
- 供职机构：上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 基于单细胞超高通量筛选的酶定向进化
- 定向进化是重要的蛋白质工程技术,在优化酶催化活性、稳定性、选择性等关键功能中有重要应用。但在利用定向进化对酶分子进行改造时,筛选通量是决定酶改造效率的关键。近年来,我们实验室发展了一系列超高通量酶活性筛选方法,通过使用单...
- 杨广宇
- 关键词：酶工程定向进化
- 文献传递
- 蛋白质与溶剂工程联用开发超嗜热脂肪酶
- 脂肪酶能够在油、水界面上水解长酰基链底物,在食品、皮革、能源、造纸等众多工业领域中都具有广泛的应用,尤其是最适温度超过80℃的超嗜热脂肪酶在高温下具有高稳定性和高催化效率,与常温脂肪酶相比具有明显的优势,是多种工业用途急...
- 杨广宇武烈冯雁
- 文献传递
- 探讨Fervidobacterium changbaicum脂肪酶的NC-loop对催化活性和稳定性的作用
- 为了深入理解NC-Ioop在催化过程、稳定性和趋异进化中的作用，应用loop删除、丙氨酸扫描突变和定点突变技术系统地研究了来自嗜热细菌Fervidobacterium changbazcum中脂肪酶FClipl的NC-l...
- 李彬春杨广宇冯雁
- 关键词：脂肪酶催化活性稳定性分析
- 文献传递
- 产碱杆菌Alcaligenes sp.KS-85来源肌酸酶活性中心的关键氨基酸功能研究被引量：2
- 2021年
- 肌酸酶(Creatinase,EC 3.5.3.3)水解肌酸生成尿素和肌氨酸,是肌酐多酶级联检测中的关键酶。为进一步解析产碱杆菌来源肌酸酶的催化机理,利用蛋白质同源建模、分子对接、丙氨酸扫描技术分析了酶与底物的相互作用,并聚焦于酶活性中心4个功能未知的保守位点Phe64、Asp102、Phe252、Phe321,通过将氨基酸残基定点突变为6种具有代表性的氨基酸,结合生化实验对其功能进行解析。经研究,所有突变体的kcat值大幅度降低;除6个突变体:F252A、F252S、F252Y、F252W、F321A、F321Y的KM值降低,其余突变体的KM均提高。结构分析表明Phe252通过与Tyr259形成的π-π堆积稳定酶-底物复合体;Asp102通过与Arg66,Gly322的氢键相互作用稳定酶反应的过渡态;Phe321,Phe64位于底物两侧,通过疏水侧链的排斥作用及空间位阻影响底物的定位。本研究通过对活性中心氨基酸残基的功能解析,为肌酸酶的催化机制解析和分子改造奠定了基础。
- 郝俊尧马富强杨广宇
- 关键词：肌酸酶活性中心分子对接
- 基于单细胞超高通量筛选方法的α-1,3-岩藻糖基转移酶分子定向进化
- 岩藻糖基转移酶(Fucosyltranferase,FucT)可以催化反应生成一系列含岩藻糖基的寡糖及其糖缀合物,在许多复杂的生理和病理过程中发挥着不可替代的重要作用。含岩藻糖的糖链结构不仅可以作为肿瘤诊断的关键分子标记...
- 谭玉萌张勇冯雁杨广宇
- 关键词：岩藻糖基转移酶
- 磷酸三酯酶突变体及其制备方法和应用
- 本发明提供了一种磷酸三酯酶突变体及其制备方法和应用。本发明由来源于嗜热细菌的Geobacillus kaustophilus HTA426的磷酸三酯酶基因出发，利用易错PCR的方法，经过多轮的突变和筛选，最终获得一个磷酸...
- 冯雁张宇安娇杨广宇
- 文献传递
- 含不饱和脂肪酸链的神经节苷脂衍生物的制备方法及其应用
- 本发明涉及到一组含有不饱和脂肪酸链的神经节苷脂衍生物在促进神经突起生长中的应用。通过鞘脂神经酰胺N‑去酰基化酶酶法合成带有不饱和脂肪酸链的神经节苷脂衍生物库，结合经典的促神经突起生长的细胞模型，发现带有不饱和脂肪酸链的神...
- 杨广宇黄锋涛冯雁
- 微生物酶作用机制及其分子设计研究
- 冯雁刘建华杨广宇刘喜朋梁如冰
- 该项目属于生物学领域，微生物生物化学学科。微生物酶高效作用机制及分子设计是生物学领域的热点和前沿课题，不仅能加深课题组对生物体内复杂生物化学反应过程的理解，也有利于构建新功能酶，为新材料、能源及医药等产品的生物制造提供解...
- 关键词：
- 关键词：微生物酶蛋白质工程
- 热稳定性提高的脂肪酶突变体及其构建方法
- 本发明提供了一种热稳定性提高的脂肪酶突变体及其构建方法。热稳定性提高的脂肪酶突变体由南极假丝酵母脂肪酶B基因出发，运用多轮定点饱和突变而获得；所述南极假丝酵母脂肪酶B具有SEQ ID No：1所示的氨基酸残基序列；所述脂...
- 冯雁谢渊杨广宇
- 文献传递
- 一组岩藻糖基转移酶突变体及其筛选方法和应用
- 本发明涉及一组岩藻糖基转移酶突变体及其筛选方法和应用。本发明通过针对岩藻糖基转移酶的荧光底物设计，结合流式细胞荧光分选的高通量筛选方法，获得了一组催化活力明显提高的岩藻糖基转移酶突变体。本发明还涉及了岩藻糖基转移酶突变体...
- 杨广宇谭玉萌冯雁韩云宾刘新平
- 文献传递
