兰珍
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中南民族大学生物医学工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省教育部产学研结合项目更多>>
- 相关领域：化学工程生物学更多>>
- 海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58的克隆、表达、纯化和鉴定被引量：1
- 2013年
- 为表达钾离子通道阻断剂Im58,设计了4条搭桥PCR引物,通过overlap PCR的方法扩增出蝎毒肽Im58DNA全长片段,选用表达载体pGEX-4T-1,将测序正确的克隆转化至大肠杆菌E.coli/Rosetta(DE3)中.通过检测不同诱导时间和IPTG浓度下融合蛋白的表达量,筛选出最优表达条件.表达蛋白经IPTG诱导后,融合蛋白再经GSH亲和层析柱纯化,将洗脱液经超滤浓缩脱盐、纯化后得GST-Im58融合蛋白,蛋白用小肠激酶酶切后通过RP-HPLC C18柱分离获得色谱纯的蝎毒肽.蝎毒肽通过Tricine系统的SDS-PAGE蛋白质电泳鉴定重组多肽的分子量大小和纯度,并由MALDI-TOF-MS来精确测定重组多肽的分子量.结果表明:Im58阳性克隆子证明成功构建了Im58原核表达载体,Tricine系统的SDS-PAGE蛋白质电泳和MALDI-TOF-MS鉴定Im58多肽表达纯化成功.
- 尹世金兰珍李羽欣
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- 少棘蜈蚣钠通道毒素NTX-Ssm97的表达、纯化和鉴定被引量：4
- 2014年
- 以同源序列比对法从湖北少棘蜈蚣毒腺转录组数据库中筛选到了一个新的毒素多肽基因NTX-Ssm97,其序列与Nav1.7抑制性多肽μ-SLPTX-Ssm6a高度同源.采用基因工程技术,构建了pGEX-4T-1-NTX-Ssm97原核表达载体,并利用E.coli Rosetta对毒素成熟肽的原核诱导表达和分离纯化.MALDI-TOF-MS质谱鉴定结果显示:纯化的NTX-Ssm97分子量与理论值基本吻合,表明少棘蜈蚣转录组数据库有助于筛选靶向Nav1.7钠通道的抑制性毒素多肽基因.
- 尹世金李羽欣陆春兰邸智勇兰珍胡青兰
- 关键词：转录组NAV1基因工程
- 海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58的克隆、表达、纯化和鉴定
- 蝎作为生存了四亿多年的古老物种之一，在漫长的进化过程中产生了具有以多肽和蛋白为活性物质的蝎毒液。这些蝎毒液对蝎子捕获猎物和防御天敌起着重要的作用。蝎毒液的活性物质一般是由20-80个氨基酸组成，大多数能与细胞膜上的离子通...
- 兰珍
- 关键词：蛋白表达电生理实验
- 文献传递
