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黄怡

作品数：13 被引量：28H指数：4
供职机构：广西医科大学附属肿瘤医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 11篇期刊文章
  • 1篇学位论文

领域

  • 12篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 11篇细胞
  • 7篇肝癌
  • 6篇癌细胞
  • 5篇肝癌细胞
  • 4篇增殖
  • 4篇肿瘤
  • 4篇肝肿瘤
  • 3篇人肝
  • 3篇人肝癌
  • 3篇细胞增殖
  • 3篇两面针
  • 3篇氯化两面针碱
  • 3篇面针
  • 2篇突变
  • 2篇人肝癌细胞
  • 2篇转录
  • 2篇转录调控
  • 2篇基因
  • 2篇甲基化
  • 2篇反义

机构

  • 6篇广西医科大学...
  • 6篇广西医科大学
  • 2篇广西医科大学...

作者

  • 12篇黄怡
  • 9篇吴琼
  • 6篇黄文涛
  • 6篇廖柳凤
  • 6篇徐恒
  • 3篇谭晓虹
  • 2篇张力图
  • 2篇阮细玲
  • 2篇苏程琳
  • 2篇刘海洲
  • 2篇梁新强
  • 2篇韦长元
  • 2篇崔英
  • 2篇唐亚梅
  • 2篇李永继
  • 1篇李敏
  • 1篇李锦源
  • 1篇谭晓红
  • 1篇何洁梅

传媒

  • 3篇广西医学
  • 2篇药物生物技术
  • 2篇中华肿瘤防治...
  • 2篇中国癌症防治...
  • 1篇世界华人消化...
  • 1篇微创医学

年份

  • 1篇2016
  • 3篇2015
  • 2篇2014
  • 4篇2013
  • 2篇2012
共 13 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
重组质粒BFP-cyclin D1的构建及表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移能力的影响被引量：1
2012年
目的构建含人cyclin D1基因全长编码区的蓝色真核荧光表达载体BFP-cyclin D1,并观察cyclin D1的表达对MCF-7增殖和迁移能力的影响。方法以人乳腺癌MCF-7细胞总RNA为模板,经PCR扩增和酶切后与pEBFP-N1质粒连接,得到重组质粒BFP-cyclin D1。转染到人乳腺癌MCF-7细胞后分为3组:实验组转染BFP-cyclin D1,阴性对照组转染pEBFP-N1;空白对照组为MCF-7,以荧光定量PCR检测基因表达;MTT实验检测细胞生长速度;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果成功构建了BFP-cyclin D1,并在人乳腺癌MCF-7细胞中呈高表达,荧光定量PCR检测示实验组cyclin D1在转染后12h开始增高,48h达到高峰并持续高表达,与激光共聚焦显微镜观察实验组蓝色荧光表达量的趋势一致;MTT实验证实实验组细胞增殖速度(48、72、96h)显著高于对照组(P<0.01);细胞迁移实验表明实验组细胞迁移能力显著高于对照组细胞(P<0.01)。结论 cyclin D1的高表达促进了人乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移,这可能与其缩短细胞周期、促进DNA合成和复制功能有关。
李永继黄怡阮细玲廖柳凤吴琼黄文涛徐恒
关键词：乳腺癌CYCLINMCF-7细胞增殖迁移
人突变型CDK4真核荧光表达质粒的构建及对人肝细胞SMMC-7702中POLD1基因表达的调控被引量：2
2012年
目的:构建包含突变型CDK4基因的真核绿色荧光表达载体,作为POLD1基因依赖的细胞周期复制调控的模型,研究POLD1基因相关的癌性增殖的机制,为干预细胞恶性增殖提供新的思路.方法:设计人突变型CDK4基因全长特异性引物进行P C R扩增人肝癌细胞系SMMC-7721总cDNA,以pEGFP-C1质粒为模板连接,得到重组质粒GFP-CDK4后进行测序和生物信息学比对分析;转染细胞分3组:实验组(转染突变型CDK4重组真核表达质粒GFP-CDK4),阴性对照组(转染空载体pEGFP-C1组)和空白对照组(SMMC-7702).通过MTT试验分析细胞增殖变化;实时荧光定量PCR技术检测CDK4、POLD1及细胞周期相关因子的表达量,Western blot检测蛋白表达的差异.结果:成功构建了人突变型CDK4基因真核表达质粒GFP-CDK4,转染到肝细胞SMMC-7702后使细胞表达融合绿色荧光的C D K4蛋白;S M M C-7721细胞中突变型的C D K4存在5个碱基突变,4个碱基插入,2个碱基缺失,这使得5个氨基酸序列发生了改变;与空白对照组及阴性对照组相比,实验组细胞增殖明显升高(0.826±0.08vs0.596±0.06,0.609±0.10,F=7.033,均P<0.05);实验组CDK4mRNA表达水平差异明显(1.94±0.11vs1.01±0.00,1.05±0.12,F=54.046,P<0.01),POLD1mRNA相应地升高(2.47±0.25vs1.16±0.00,1.26±0.23,F=135.496,P<0.01);稳定转染细胞的蛋白水平变化趋势与基因相同,其中实验组CDK4(0.65±0.03vs0.41±0.03,0.39±0.05,F=14.665,均P<0.05),P125(0.54±0.04vs0.30±0.07,0.25±0.06,F=11.788,均P<0.05).结论:人突变型CDK4基因的真核表达载体GFP-CDK4显著促进肝细胞的增殖能力,这与POLD1基因及P125蛋白的高表达相关.
李永继黄怡阮细玲廖柳凤吴琼黄文涛徐恒
关键词：突变CDK4
氯化两面针碱通过甲基化率调控p53和E2F介导肝癌POLD1基因表达的初步研究被引量：2
2016年
探讨氯化两面针碱(Nitidine chloride,NC)通过影响POLD1基因启动子甲基化率及调节转录调控因子p53和E2F的特异性结合对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。该研究采用CCK8,焦磷酸测序,RT-PCR,Western blot等技术方法论证了NC通过影响POLD1基因启动子甲基化率,间接调控POLD1基因转录活性,从而降低了DNA聚合酶δ的合成效率,抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖。不同剂量的NC(0.5,1.0,2.0 mg/m L)处理肝癌细胞SMMC-7721 48 h后,细胞增殖抑制率逐渐增大,分别为21.1%,35.2%,92.1%,呈明显的剂量依赖性。POLD1基因启动子的甲基化水平整体上升。经方差分析,与对照组相比,1.0,2.0 mg/m L实验组的E2F结合位点甲基化率随浓度增加而增高(F=10.21,P<0.05),差异有统计学意义,0.5 mg/m L实验组与对照组相比无明显差异(P=0.694)。而p53结合位点甲基化率随NC浓度增加呈下降趋势,实验组与对照组有明显差异(F=9.76,P<0.05),其中2.0 mg/m L实验组有显著差异(P<0.01)。实验组POLD1 mRNA和蛋白p125随NC浓度增加而下降,采用秩和检验,X2分别为40.19,36.65,P<0.05,1.0、2.0 mg/m L实验组与对照组相比,差异有统计学意义。结果显示氯化两面针碱可能通过调节SMMC-7721细胞POLD1基因的甲基化水平,影响其启动子转录调控因子的作用,从而抑制了POLD1基因表达,降低DNA聚合酶δ活性,抑制肝癌细胞增殖的作用。
黄怡韦长元廖柳凤吴琼谭晓虹徐恒
关键词：肝癌氯化两面针碱甲基化转录调控P53E2F
鼻咽癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性的检测及其意义被引量：4
2015年
目的探讨鼻咽癌患者外周血淋巴细胞亚群和NK细胞活性与治疗前后EB病毒IgA／VCA抗体水平高低、是否转移及不同临床分期的关系及其意义。方法采用流式细胞术（FCM）检测58例鼻咽癌患者治疗前后外周血淋巴细胞亚群和NK细胞的百分含量。结果①鼻咽癌患者治疗后和治疗前比较，CD8＋细胞水平显著升高，CD4＋和CD19＋细胞水平和CD4＋／CD8＋的比值显著下降，差异有统计学意义（P〈0．05），CD3＋的差异无统计学意义（P〉0．05）；②EB病毒IgA／VCA抗体高滴度和低滴度的鼻咽癌患者比较，在治疗前，NK细胞和CD19＋细胞水平显著升高，差异有统计学意义（P〈0．05），其余指标差异无统计学意义（P〉0．05）；在治疗后，各项指标差异无统计学意义（P〉0．05）；③有淋巴结转移和无淋巴结转移的鼻咽癌患者比较，在治疗前，NK细胞和CD19＋细胞水平显著升高，差异有统计学意义（P〈0．05），其余指标差异无统计学意义（P〉0．05）；在治疗后，各项指标差异无统计学意义（P〉0．05）；④Ⅲ--Ⅳ期和Ⅰ～Ⅱ期的鼻咽癌患者比较，在治疗前，CD19＋细胞水平显著升高，差异有统计学意义（P〈0．05），其余指标差异无统计学意义（P〉0．05）；在治疗后，各项指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论鼻咽癌患者机体细胞免疫状态与机体是否存在局部淋巴结和远处转移无明显相关性，但在进行治疗后机体细胞免疫抑制状态较治疗前明显改善。
梁新强刘海洲唐亚梅黄怡苏程琳崔英张力图利基林
关键词：鼻咽癌淋巴细胞亚群流式细胞术
反义RNA技术对抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因表达的研究被引量：5
2013年
目的:应用反义RNA技术抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的表达,探索采用该技术干预肝癌的可行性。方法:制备人POLD1基因的反义RNA表达质粒,同时建立空白对照组与阴性对照组,由此将实验分为阴性对照组(转染空载体的SMMC-7721细胞)、空白对照组(肝癌细胞SMMC-7721)和实验组(转染人POLD1基因反义RNA表达质粒的肝癌SMMC-7721细胞)3组。MTT实验分析细胞增殖变化,并在转染SMMC-7721细胞48h后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测POLD1基因的表达。结果:MTT实验显示,与空白对照和阴性对照组相比,转染了反义RNA的实验组细胞增殖受到明显抑制。在转染后24～72h,实验组吸光度24h为0.306 7±0.015 4,48h为0.459 2±0.033 2,72h为0.567 1±0.061 1,与空白和阴性对照组相比,P值均<0.05。实时荧光定量PCR实验显示,实验组POLD1的mRNA表达明显下调为0.142 5±0.020 5,阴性对照组为1.017±0.188,空白对照组为1.00±0.00(F=26.5,P<0.05),说明POLD1基因表达受抑制。蛋白质印迹实验显示,POLD1基因蛋白水平(p125)变化趋势与mRNA相同,均为下调,其中实验组为0.222 3±0.009 7,阴性对照组为0.237 9±0.005 9,空白对照组为0.235 4±0.003 4(F=1 365.754,P值均<0.05),说明反义RNA可抑制p125蛋白表达,结论与基因水平趋势一致。结论:针对POLD1基因设计的反义RNA体外抑制了肝癌细胞SMMC-7721的增殖,这与POLD1在基因和蛋白水平的表达下调有关。
吴琼黄文涛黄怡徐恒
关键词：肝肿瘤反义RNA基因表达
肝癌细胞中POLD1基因表达的表观遗传学调控
POLD1是DNA聚合酶δ功能亚基p125的编码基因，在DNA复制、修复及细胞增殖中起重要作用。经典理论中，POLD1是一个“管家基因”;然而，对多例原发性肝癌病例分析发现，癌组织的POLD1基因表达及其编码的蛋白p12...
黄怡
关键词：肝癌表观遗传学
鼻咽癌患者治疗前后外周血CD4^+ CD25^+调节性T细胞和CD19^+ CD35^+细胞的变化被引量：5
2015年
目的探讨鼻咽癌患者治疗前后外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tr)比例和CD19+CD35+细胞比例的变化及其与鼻咽癌复发或转移的关系。方法临床分期为Ⅱ期的54例鼻咽癌患者,随访3年后,有复发或转移8例,无复发转移46例。采用流式细胞术检测治疗前后患者外周血CD4+CD25+Tr比例和CD19+CD35+细胞比例。结果与治疗前比较,54例鼻咽癌患者治疗后CD4+CD25+Tr比例下降(P<0.01),CD19+CD35+细胞的比例升高(P<0.01)。8例有复发或转移的鼻咽癌患者,上述两指标在治疗后,与治疗前比较差异均无统计学意义(P>0.05);而46例无复发或转移的鼻咽癌患者,治疗后CD4+CD25+Tr比例下降,CD19+CD35+细胞的比例升高(P<0.01)。结论检测鼻咽癌患者治疗前后外周血CD4+CD25+Tr比例和CD19+CD35+细胞比例,可能有助于及早发现鼻咽癌复发或转移。
梁新强刘海洲唐亚梅黄怡苏程琳张力图崔英利基林
关键词：CD4^+CD25^+调节性T细胞
氯化两面针碱对肝癌细胞SMMC-7721 POLD1基因甲基化及细胞增殖影响研究被引量：3
2014年
目的探讨氯化两面针碱(nitidine chloride,NC)对肝癌SMMC-7721细胞POLD1基因甲基化及细胞增殖的影响。方法不同剂量的NC(0.5、1.0和2.0mg/mL)作用于人肝癌SMMC-7721细胞48h后,采用焦磷酸技术、RT-PCR和CCK8方法分别测定不同剂量的NC对SMMC-7721细胞中POLD1基因甲基化率,mRNA表达及细胞增殖抑制率的影响。结果不同剂量的NC处理肝癌细胞SMMC-7721 48h后,实验组POLD1基因的甲基化水平整体上升,对照组与实验组甲基化率分别为4.26±0.49、4.14±0.75、4.90±0.64和5.67±0.77。采用方差分析,组间两两比较,1.0、2.0mg/mL实验组与对照组相比较,甲基化率有明显的上升,差异有统计学意义,P值分别为0.041、0.001;0.5mg/mL实验组与对照组相比差异无统计学意义,P>0.05。实验组间两两比较,差异有统计学意义,P值<0.05。对照组和实验组的POLD1基因mRNA相对表达量分别为1.02±0.81、0.83±0.19、0.44±0.09和0.49±0.23,呈下降趋势。秩和检验分析,组间表达差异明显;1.0、2.0mg/mL实验组与对照组相比,差异有统计学意义,P<0.001;0.5mg/mL实验组与对照组相比差异无统计学意义,P>0.05。实验组间两两比较,差异有统计学意义,P<0.05。随着NC浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐增大,分别为21.1%、35.2%和92.1%,呈明显的剂量依赖性。结论 NC可能通过调节SMMC-7721细胞POLD1基因的甲基化水平,增强其启动子的甲基化,抑制POLD1基因表达,从而降低DNA聚合酶δ活性,达到抑制肝癌增殖的作用。
黄怡韦长元徐恒谭晓虹廖柳凤吴琼
关键词：肝癌氯化两面针碱
RNA干扰技术抑制人肝癌细胞POLD1基因表达的研究被引量：2
2014年
目的应用RNA干扰技术抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的表达,探索该技术干预肝癌的可行性。方法制备4个针对人POLD1基因的shRNA表达质粒,转染SMMC-7721细胞48 h后,荧光定量PCR法检测POLD1基因的表达,CCK-8检测细胞生长情况。结果测序鉴定证实4个shRNA表达质粒构建成功,将其转染SMMC-7721细胞后,NEO-POLD1-1和NEO-POLD1-4表达质粒抑制效果明显,使SMMC-7721细胞的增殖受到抑制,并且使POLD1基因表达在mRNA水平抑制,NEO-POLD1-1相对表达量为(0.1425±0.0205),NEO-POLD1-4相对表达量为(0.209±0.009)。结论针对POLD1基因设计的shRNA在体外有效地抑制了POLD1基因mRNA的表达和肝癌细胞的增殖,且实现RNA干扰具有序列选择性。
吴琼黄文涛黄怡廖柳凤谭晓红徐恒
关键词：肝肿瘤RNA干扰技术
氯化两面针碱通过Rb/E2F途径抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖作用机制研究被引量：4
2013年
氯化两面针碱(Nitidine chloride,NC)是从芸香科植物两面针根部提取的一种天然生物碱,具有很好的抗肿瘤活性,在体外能抑制鼻咽癌,肺癌等细胞的增殖。研究表明NC可导致细胞周期G2/M期阻滞,并诱导细胞凋亡。E2F/RB在细胞周期调控中起重要作用,它们与CyclinD1、CDK4、CyclinE、CDK2构成复杂的反馈调控网路,调节细胞从G1期到S期的过渡,推动了细胞周期的转变。另外,研究表明E2F是重要的转录因子,参与了基因的转录调控。研究肝癌细胞SMMC-7721经两面针碱处理后RB/E2F通路的相关分子水平变化,以及氯化两面针碱在RB/E2F途径抑制肝癌细胞增殖,参与细胞凋亡作用的机制。应用CCK8方法测定NC对SMMC-7721细胞存活率的影响;Annexin-V和碘化丙碇(propidium i-odide,PI)双染法检测细胞凋亡和坏死情况;RT-PCR检测不同剂量NC对E2F、RB mRNA表达影响;WB检测E2F蛋白含量的变化。结果显示NC可抑制肝癌细胞增殖,降低细胞存活率,促进细胞凋亡,明显降低细胞中E2F、RB mRNA和E2F蛋白的表达,并呈浓度依赖性。NC通过作用于E2F/RB调控通路,抑制了E2F/RB的表达,参与了细胞的增殖抑制和诱导了细胞凋亡。
黄怡廖柳凤黄文涛吴琼何洁梅李敏徐恒
关键词：氯化两面针碱转录调控E2FRB肝癌
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