王长青
- 作品数：31 被引量：78H指数：6
- 供职机构：深圳市宝安区人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西医疗卫生重点科研课题广西壮族自治区自然科学基金更多>>
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- 转录因子E2F-1 siRNA对胃癌MGC803细胞体外侵袭及增殖能力的影响被引量：7
- 2008年
- 背景与目的:转录因子E2F-1作为细胞周期进程中重要的调控因子,与肿瘤的发生有着密切的关系。本研究通过转染人E2F-1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1表达及侵袭和增殖能力的影响。方法:用脂质体LipofectamineTM2000将具有短发夹结构的人E2F-1siRNA表达质粒转染至MGC803细胞,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blot)技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白的表达;应用体外侵袭实验及克隆实验分别检测E2F-1 siRNA表达质粒对MGC803细胞侵袭力和增殖能力的影响。结果:成功转染E2F-1 siRNA表达质粒48h后,MGC803细胞中E2F-1基因mRNA表达的抑制率超过90%;与未转染组及阴性对照组细胞比较,E2F-1蛋白的表达分别降低81.5%和79.6%。转染pSilencer4.1-E2F-1质粒组的穿膜细胞数(18.0±2.6)与阴性对照组(48.0±4.6)和空白对照组(54.0±5.6)比较差异有统计学意义(P<0.05),其细胞集落形成数(46.0±2.0)与阴性对照组(122.3±1.5)和空白对照组(128.7±2.1)比较差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:E2F-1siRNA表达质粒可显著下调E2F-1基因在胃癌MGC803细胞中的表达,在一定程度上抑制胃癌细胞的侵袭和增殖。
- 尹永硕肖强谢玉波李雷王长青马玉林唐振勇
- 关键词：E2F-1MGC803细胞增殖
- 转录因子E2F-1和肿瘤
- 2010年
- 细胞周期相关转录因子E2F-1（E2F transcription factor 1），是细胞周期相关转录因子E2F家族成员之一；它参与多种生理、病理过程的调节，同时兼具癌基因和抑癌基因的功能，受到广泛关注。
- 王长青肖强
- 关键词：转录因子E2F-1肿瘤
- 同源盒基因CDX2mRNA在胃癌中的定量表达及临床意义被引量：4
- 2009年
- 目的探讨同源盒基因CDX2mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测CDX2mRNA在胃癌组、癌旁组和正常对照组中的表达情况,并联系临床病理特征进行分析。结果胃癌组中CDX2mRNA的阳性表达率为37.9%(22/58),癌旁组为63.8%(37/58),正常对照组不表达,组间比较差异有显著性(P<0.05);CDX2mRNA在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率差异有显著性(P<0.05)。结论CDX2mRNA在癌旁和胃癌组织中具有较高的表达量,其转录表达量与各类临床病理特征之间有密切的联系,提示CDX2mRNA的高表达可能与胃癌的发生有关。
- 唐振勇肖强李雷王长青马玉林尹永硕
- 关键词：CDX2实时荧光定量PCR胃肿瘤
- 转录因子E2F-1 mRNA在胃癌中的定量表达及临床意义
- 2008年
- 目的:探讨转录因子E2F-1 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测E2F-1 mRNA在胃癌组、癌旁组和正常对照组中的表达情况,并联系临床病理特征进行分析。结果:胃癌组中E2F-1 mRNA的阳性表达率为72·4%(42/58),癌旁组为50·0%(29/58),正常对照组为27·9%(12/43),组间比较差异有统计学意义(P<0·05);E2F-1 mRNA在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率大致接近,差异无统计学意义(P>0·05)。结论:E2F-1 mRNA在胃癌组织中具有较高的表达量,其转录表达量与各类临床病理特征之间没有必然联系,提示E2F-1 mRNA的高表达可能与胃癌的发生有关。
- 唐振勇肖强李雷王长青马玉林尹永硕
- 关键词：E2F-1实时荧光定量PCR胃癌
- 转录因子E2F-1 siRNA表达质粒的构建及对胃癌MGC803细胞的沉默效应被引量：1
- 2008年
- 目的:通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响。方法:将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4·1-CMVneo表达质粒,并做酶切及测序鉴定。用脂质体把重组质粒转染至细胞,采用实时定量PCR(real-time quantitativePCR)及蛋白印迹(western blotting)技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白表达。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了E2F-1 siRNA表达质粒;它可显著抑制MGC803细胞中E2F-1基因mRNA及蛋白表达,与未转染组及阴性对照组细胞比较,分别降低了86·4%、86·1%和81·5%、79·6%。结论:pSilencer4·1-E2F-1重组质粒能抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1基因的表达,为进一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治疗研究提供了实验基础。
- 尹永硕肖强谢玉波李雷王长青唐振勇马玉林崔建华
- 关键词：胃癌MGC803细胞E2F-1重组表达质粒
- E2F-1基因对HepG2肝癌细胞增殖影响的研究被引量：2
- 2013年
- 目的了解转录因子E2F-1对肝癌细胞HepG2增殖的影响。方法脂质体Lipofectami-neTM2000将pCMV-E2F-1-HA2载体转染HepG2肝癌细胞,然后用含G418的培养液筛选获得具有Genectin抗性的过表达E2F-1的肝癌细胞株。通过MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖的变化。结果 MTT和克隆形成实验结果显示,过表达E2F-1的HepG2/E2F-1细胞组与HepG2/EV细胞组和HepG2细胞组相比,其增殖速度明显减慢(P<0.01)。结论 E2F-1基因过表达可抑制HepG2肝癌细胞的增殖。
- 王长青吴江周娟
- 关键词：E2F-1肝肿瘤细胞周期细胞增殖
- 小分子干扰RNA对胃癌MGC803细胞E2F-1表达及其生物学行为的影响被引量：3
- 2009年
- 目的观察小分子干扰RNA（siRNA）对胃癌MGC803细胞E2F-1基因表达及其生物学行为的影响。方法将实验组（E2F-1-siRNA）和阴性对照组（negative control-siRNA）转染进MGC803细胞，48h后采用实时定量聚合酶链反应（PCR）及Western blot技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白的表达，噻唑蓝（M3T）比色法检测MGC803细胞增殖的变化，流式细胞仪检测MGC803细胞周期变化。结果E2F-1-siRNA有效抑制胃癌细胞E2F-1mRNA和蛋白的表达并且影响MGC803细胞的增殖，与阴性对照组及未转染组细胞比较mRNA降低了84．8％和85．3％（F=14．35，P〈0．05），蛋白降低了77．2％和79．6％，MGC803细胞增殖分别抑制了69．0％和81．6％，差异有统计学意义（F=170．18，P〈0．05）；同时E2F-1-siRNA促使更多MGC803细胞DNA含量聚集于G2／M期附近，G2／M期DNA含量比例为（54．98±3．46）％，与阴性对照组（44．70±3．82）％和未转染组（31．47±2．12）％比较，差异有统计学意义（F=88．90，P〈0．05）。结论E2F-1-siRNA可以有效抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1 mRNA及蛋白的表达，使G1期细胞的DNA含量下调，细胞分裂停滞在G2／M期附近，抑制胃癌细胞的增殖。
- 尹永硕李雷谢玉波王长青唐振勇马玉林肖强
- 关键词：胃癌小分子干扰RNA细胞周期增殖
- E2F-1过表达对胃癌细胞生物学行为的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨E2F-1对胃癌细胞生物学行为影响的分子机制。方法分别抽取转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞和未转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞的总RNA。纯化mRNA,逆转录合成cDNA标记后,与22K人类基因表达谱芯片进行杂交,扫描后筛选出表达差异的基因。随机选取3个差异表达基因,分别设计引物,用半定量RT-PCR检测验证。结果在21522条基因中,两组细胞间的差异表达基因有740条,其中上调基因405条,下调基因335条。差异基因中有73条功能信息不明。随机选取的3个差异表达基因的RT-PCR结果与基因芯片扫描结果相似,具有相同的方向性。结论胃癌的发生发展是多基因相互作用、多种信号通路相互调节的结果。生物信息学分析显示,E2F-1基因可以通过TP53信号传导途径影响胃癌MGC-803细胞生物学行为的改变,还与众多基因的差异性表达密切相关。
- 王晓通李雷肖强谢玉波王长青
- 关键词：胃癌E2F-1基因表达谱芯片差异表达基因
- 循证护理在老年骨科卧床病人便秘防治中的应用被引量：8
- 2012年
- [目的]探讨循证护理在老年骨科卧床病人便秘防治中的应用。[方法]在125例老年骨科卧床病人便秘防治中应用循证护理,通过提出问题、寻找实证、运用实证,对病人实施最佳护理。[结果]125例病人发生便秘33例,发生率为26.4%。[结论]在老年骨科卧床病人便秘防治中应用循证护理,可减少便秘的发生。
- 周娟王长青
- 关键词：骨科卧床老年病人便秘循证护理
- 转录因子E2F-1过表达抑制胃癌细胞MGC-803的增殖
- 2010年
- 目的了解E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖、生长和细胞周期的影响。方法 PCR扩增E2F-1基因片段,然后经限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选。用脂质体Lipofectamine2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株。RT-PCR和Western blot技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达的情况。对稳定转染E2F-1的胃癌MGC-803/E2F-1细胞(实验组)、转染空载体的MGC-803/EV(阴性对照组)及未转染的MGC-803细胞进行MTT法检测,绘制生长曲线和计算细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞周期分布。结果 RT-PCR和Western blotting实验证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1。MTT法检测发现,与MGC-803/EV细胞组和MGC-803细胞组相比,胃癌MGC-803/E2F-1细胞的生长受到明显抑制,增殖率下降(26.61±5.19)%vs(93.4±10.29)%、(100±0.00)%(均P<0.01);细胞周期分析显示MGC-803/E2F-1组的细胞在G0/G1期所占比例为70.70%,高于MGC-803/EV组(59.60%,P<0.01)和MGC-803细胞组(1.40%,P<0.01);MGC-803/E2F-1组的细胞在S期所占比例为17.60%,明显低于MGC-803/EV组的30.70%(P<0.01)和MGC-803细胞组的27.30%(P<0.01)。结论 E2F-1基因过表达抑制胃癌细胞的增殖和生长,细胞周期停滞在G0/G1期。
- 王长青尹永硕李雷谢玉波肖强
- 关键词：E2F-1胃癌MGC-803细胞转录因子
