- 人MICA*008等位基因预筛选及其真核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2010年
- 目的:应用序列特异性PCR技术(PCR-SSP)分析不同细胞系中MICA*008等位基因特异性位点,筛选出人MICA*008基因型,并构建其真核表达载体。方法:PCR-SSP技术分析本实验室保存的多种人源性细胞系中多态性基因MICA的特异性位点,预筛选出包含MICA*008等位基因的细胞系,应用RT-PCR扩增MICA*008基因片段,随后克隆到pcDNA3(+)真核表达载体,用经过测序、鉴定的pcDNA3(+)/MICA*008质粒转染结肠癌细胞系sw480,通过流式细胞术检测MICA膜蛋白表达水平。结果:预筛选出包含MICA*008基因型的细胞系,成功构建了pcDNA3(+)/MICA*008质粒,pcDNA3(+)/MICA*008转染sw480细胞系后,其MICA膜蛋白表达水平明显提高。结论:验证了应用PCR-SSP技术对细胞系中对特定MICA等位基因预筛选的可行性,成功构建了多态性MICA基因中MICA*008等位基因的真核表达载体pcDNA3(+)/MICA*008并转染结肠癌细胞系sw480,为后续体外研究MICA*008在结肠癌及其他肿瘤的作用奠定了基础。
- 范萌张章王宏涛董光龙
- 关键词：MICA真核表达载体结肠癌细胞
- CD112(Nectin2/PRR2)在结肠癌的表达及其临床意义被引量：3
- 2010年
- 目的:研究NK细胞活化性受体CD226(DNAM-1)的配体CD112(nectin-2)在结肠癌细胞系中的表达情况,检测结肠癌组织中CD112的表达,分析其与临床病例组织病理分级的关系。方法:流式细胞术(FCM)及Westernblot检测结肠癌细胞系(Colo205、SW116、SW480)上CD112的表达情况。以免疫组织化学法检测90例结肠癌组织和30例正常结肠组织对照中CD112的表达情况。结果:FCM检测CD112在Co-lo205、SW116和SW480结肠癌细胞系的阳性表达率分别为99.3%、47.1%和98.7%。CD112在结肠癌组织中其阳性表达率为42.35%,在正常结肠组织对照中阳性表达率为10%,两组之间的阳性表达率差异有统计学意义(P=0.001)。不同分化程度、不同Dukes分期结肠癌组织之间CD112的阳性表达率差异无统计学意义(P=0.997、P=0.777);CD112阳性表达强度与分化程度和Dukes分期之间无相关性(r=-0.006、r=-0.032)。结论:CD112在结肠癌组织中表达高于正常对照组织,有统计学意义。在结肠癌细胞系表达较高。可以试图通过基因转染上调结肠癌组织中CD112的表达强度,利用CD112与NK细胞活化性受体CD226结合,活化NK细胞并启动NK细胞对结肠癌的杀伤作用,为结肠癌临床免疫治疗提供思路和理论依据。
- 王宏涛张章范萌王璐董光龙
- 关键词：结肠癌免疫组织化学流式细胞术WESTERNBLOT
