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pQE-EGFP原核表达载体的构建及其表达和鉴定被引量：4: 2008年; 目的:利用分子克隆技术构建原核表达载体pQE-EGFP,在大肠埃希菌中高效表达与鉴定。方法:以质粒pEGFP-N2为模板,采用PCR方法特异性扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,将其克隆于原核表达载体pQE-31,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109,用异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导表达;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定表达蛋白质。结果:PCR扩增得到了EGFP全长结构基因。所构建的pQE-EGFP重组质粒经酶切及测序鉴定结果与设计序列一致;转化大肠埃希菌JM109,经IPTG诱导后,目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE、Western blotting初步测定目的蛋白的相对分子质量约为28 500,与理论预期值一致。结论:pQE-EGFP重组质粒的成功构建、表达和鉴定为TAT-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。; 李欢胡晓梅杨杰饶贤才丛延广黎庶周莹冰朱军民胡福泉; 关键词：增强型绿色荧光蛋白基因克隆蛋白表达蛋白鉴定

TAT-EGFP融合蛋白的表达纯化及穿膜活性的研究被引量：4: 2008年; 目的在大肠埃希菌中高效表达TAT-EGFP融合蛋白并鉴定纯化,然后进行穿膜活性的研究。方法以本室前期构建的重组质粒pQE-EGFP为模板,采用PCR方法特异性扩增TAT-EGFP基因序列,随后克隆于原核表达载体pQE-31,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109,IPTG诱导表达;SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达蛋白质,经Ni2+-金属螯合亲和层析纯化,将纯化蛋白加入体外培养的小鼠黑色素瘤B16细胞中,荧光显微镜下观察TAT蛋白的穿膜活性。结果成功构建了pQE-TAT-EGFP重组质粒的,转化大肠埃希菌JM109,经IPTG诱导,目的蛋白表达率为25%,SDS-PAGE、Western blotting初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约为30160,纯化得到了目的融合蛋白TAT-EGFP。并在体外培养的B16细胞中证实TAT-EGFP融合蛋白穿透生物膜的能力。结论通过对TAT-EGFP融合蛋白穿膜活性的分析,证实了TAT具有穿膜活性,为TAT-PEⅢ融合蛋白抑瘤活性的研究提供了理论依据,也为生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用奠定了基础。; 李欢胡晓梅陈志瑾丛延广黎庶周莹冰李明胡福泉; 关键词：纯化

TAT-PEⅢ融合蛋白表达、纯化及抑瘤活性的研究: 恶性肿瘤严重威胁着人类的生命健康。手术、放疗和化疗是治疗肿瘤的常用方法。但放疗和化疗因同时杀伤肿瘤细胞和正常细胞，副作用极大;而且化疗药物还有药效低的缺点。细胞毒素的介入治疗是一类针对肿瘤细胞进行治疗的新方法，通过介入手...; 李欢; 关键词：抑瘤活性抗癌药物; 文献传递

一种用于肿瘤局部介入治疗的TAT－PEⅢ融合蛋白及制备方法: 本发明提供一种用于肿瘤局部介入治疗的TAT－PEIII融合蛋白，它由人类免疫缺陷病毒的TAT PTD与铜绿假单胞菌外毒素A的III区组成。本发明还提供一种用于肿瘤局部介入治疗的TAT－PEIII融合蛋白的制备方法。用本发...; 胡晓梅胡福泉饶贤才黄建军李欢; 文献传递

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李欢