房鑫
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：南京工业大学食品与轻工学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省科技支撑计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌来源γ-谷氨酰转肽酶的克隆表达和性质比较被引量：4
- 2014年
- γ-谷氨酰转肽酶（GGT）是生物体内谷氨酰循环的关键酶,在生物有机合成领域具有重要的应用价值。今建立了大肠杆菌和枯草芽孢杆菌GGT的克隆、重组及诱导表达方法。在此基础上,分别考察了重组大肠杆菌GGT（rE_GGT）和重组枯草芽孢杆菌GGT（rB_GGT）的催化特性和稳定性。结果表明,rE_GGT对供体对硝基苯胺（GpNA）的亲和力（Km）优于rB_GGT,但rB_GGT的催化常数（kcat）高达3.48×105 s-1,是rE_GGT的20倍。稳定性研究表明,rE_GGT在pH 6-9和T〈45℃条件下的稳定性明显优于rB_GGT;但当温度超过45℃时,rB_GGT的稳定性更佳。通过对rE_GGT和rB_GGT的氨基酸组成及其大、小亚基界面相互作用力的分析表明,rE_GGT大小亚基间疏水键的数目明显多于rB_GGT,有助于稳定其四级结构,使其在中低温下具有良好的稳定性;而rB_GGT氨基酸组成中荷电残基和芳香族残基的比例较高,可有效维持其二级结构的稳定性。
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- 关键词：Γ-谷氨酰转肽酶反应动力学稳定性
- 介孔TiO_2晶须材料的硅烷化改性及其对载体pzc值和酶负载性能的影响被引量：4
- 2013年
- 以3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)对介孔二氧化钛晶须(MTiO2_ws)进行表面修饰,使其电荷零点值(pzc)由5.3提高至6.8,改性后材料MTiO2_ws-APTES的比表面积略有上升,但孔结构基本不变。以MTiO2_ws-APTES为载体对γ-谷氨酰转肽酶(GGT)进行了固定化,当给酶量小于150U.g-1时,酶活回收率均大于99%,固定化酶MTiO2_ws-APTES-GGT的比活力最高可达184.0U.g-1,对酶的负载性能显著优于MTiO2_ws。相比于游离酶,MTiO2_ws-APTES-GGT的最适温度和热稳定性均略有下降,但pH稳定性明显优于游离酶和以MTiO2_ws为载体的固定化酶(MTiO2_ws-GGT);MTiO2_ws-APTES-GGT对γ-谷氨酰对硝基苯胺(GpNA)的亲和力常数(Km)为0.889mmol·L-1,较游离酶有所上升,但小于MTiO2_ws-GGT。MTiO2_ws-APTES-GGT的稳定性良好,经4℃下储藏60d,连续使用21批次后残余酶活仍可达初始值的80.07%。
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- 关键词：化学改性固定化酶
