陈丽丽
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学食品科学与工程学院更多>>
- 发文基金：吉林省自然科学基金吉林省教育厅资助项目博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- Thermotoga neapolitana α-葡萄糖苷酶基因的克隆和表达
- a-葡萄糖苷酶(a-glucosidase, EC3.2.1.20)也称作0α-葡萄糖基转移酶,或者α-葡萄糖转苷酶。它可以从低聚糖类底物的非还原末端切开α-糖苷键从而释放出葡萄糖,也可以将游离出的葡萄糖残基转移到另一糖...
- 陈丽丽
- 关键词：克隆酶学性质
- 文献传递
- 栖热袍菌α-葡糖苷酶的基因克隆表达及酶学性质被引量：1
- 2013年
- 用分子克隆手段获得栖热袍菌(Thermotoga neapolitana DSM 4359)中的α-葡糖苷酶基因,构建该基因的原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。以Thermotoga neapolitana DSM 4359的α-葡糖苷酶基因DNA为模板,通过PCR扩增目的基因,并连接至表达载体中,构建重组质粒pET-28a-glu,然后转化到大肠杆菌中,加IPTG诱导获得重组蛋白。提取粗酶,用葡萄糖测定试剂盒测酶活。序列分析结果表明,该基因的读码框碱基长度为2166bp,编码722个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明,α-葡糖苷酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,蛋白分子量约为62KDa;酶的最适反应温度为70℃,最适pH为5.0。
- 刘琼李大军陈丽丽曲宁宁张雪毕云枫
- 关键词：Α-葡糖苷酶克隆
- Coprinopsis cinerea漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：4
- 2012年
- 通过反转录反应从Coprinopsis cinerea okayama 7#130中克隆得到laccase 1,应用SignalP 3.0 Server软件分析其氨基酸序列后,设计不含信号肽序列的新引物扩增得到漆酶基因,构建重组酵母表达载体pPIC9K-lac1,电击转化毕赤酵母GS1115,并用甲醇诱导表达,之后研究重组酶的酶学性质。克隆得到的laccase 1碱基数为1 593 bp,编码530个氨基酸,其中信号肽包含18个氨基酸。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示重组蛋白大小约为65 kDa。酶学性质研究表明,该酶最适反应温度为45℃,最适pH值为4.3。成功分泌表达的漆酶活力达到1.108 U/mL。
- 华欣春陈丽丽毕云枫沈明浩
- 关键词：漆酶基因毕赤酵母分泌表达
- 一株嗜热梭菌β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达
- 2012年
- 以嗜热梭菌(Symbiobacterium thermophilum IAM 14863)基因组DNA为模板克隆了编码葡聚糖内切酶的基因,同时将该酶基因构建于表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a-Glu,转化至E.coli BL21(DE3)PLYS中并进行表达。结果表明:该基因大小为1 101 bp,共编码366个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明该基因在E.coli BL21(DE3)PLYS中得到了有效表达,相对分子质量约为60 kDa,纯化后重组酶活力为103 U/mL;酶学性质实验结果表明:酶最适pH值为5左右,最适反应温度为55℃,且此酶具有良好的耐热性(75℃左右)和pH值稳定性。
- 蒋海芹毕云枫华欣春陈丽丽徐雪霏沈明浩
- 关键词：纤维素克隆原核表达
- Thermotoga neapolitana α-葡萄糖苷酶基因克隆及表达被引量：4
- 2011年
- 本文拟克隆新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana DSM 4359)的一种α-葡萄糖苷酶基因(TNAG),其GenBank注册号为lcl27401。首先以T.neapolitana DSM 4359基因组DNA为模板,通过PCR扩增目的基因并完成T克隆,在NCBI数据库中比对结果表明:目的基因与Thermotoqa sp.RQ2等氨基酸序列相似度高于99%。再将目的基因连接至表达载体pET-32a(+),并导入大肠杆菌Rosetta中用IPTG诱导表达。SDS-PAGE显示表达蛋白的大小约为72KDa。热纯化后酶液测活反应的最适温度为80℃,最适pH在5.0左右。
- 陈丽丽陈萍华欣春蒋海芹刘琼毕云枫
- 关键词：Α-葡萄糖苷酶克隆
