潘伟芹
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 供职机构：南京师范大学更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 硫化物醌氧化还原酶基因载体构建及其转基因工程乳酸菌菌株
- 本发明涉及硫化物醌氧化还原酶基因载体（pMG36e-SQR-Myc）构建及其转基因工程乳酸菌菌株,属于生物技术领域。选用pcDNA3.1-SQR-Myc真核表达质粒为最初原材料，将SQR-Myc基因片段，连接于pMG36...
- 于建宁王公金徐小波潘伟芹于峰祥李燕陈哲
- 文献传递
- SQR基因在Nisin抗性乳酸乳球菌中的表达
- 2014年
- 为了研究硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因的乳酸菌表达载体pLEB590-SQR的构建及其在乳酸乳球菌MG1363中的表达,通过限制性内切酶酶切载体pLEB590与目的片段SQR,回收纯化并用T4连接酶进行连接,连接产物通过电转化法转化到乳酸菌中,提取所得到的乳酸乳球菌质粒pLEB590-SQR进行双酶切鉴定与普通PCR鉴定;并通过电转化将重组质粒导入乳酸乳球菌MG1363中,在含有Nisin(乳酸链球菌素)的选择培养基中筛选阳性克隆,采用SDS-PAGE电泳和Western杂交检测SQR蛋白质的表达情况。最后检测重组质粒在MG1363中的遗传稳定性。结果显示,SQR乳酸菌重组表达载体pLEB590-SQR构建成功,从MG1363中成功检测到目的蛋白质SQR的表达,携带pLEB590-SQR的MG1363遗传稳定性达90%以上。乳酸乳球菌MG1363可以用来表达硫化物-醌氧化还原酶(SQR)。
- 于建宁潘伟芹王公金徐小波李燕于峰祥
- 关键词：乳酸菌
- 硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因真核表达载体的构建及表达
- 2011年
- 探讨SQR基因真核表达载体pcDNA3.1(-)-SQR-Myc的构建及其在真核细胞中的表达。根据已知荚膜红杆菌SQR基因序列设计5'端和3'端引物,采用PCR方法获得SQR基因,通过pMD-18T载体构建得到中间质粒pMD-18T-SQR-Myc;采用限制性内切酶XhoⅠ和KpnⅠ双酶切该中间质粒,将SQR基因插入真核表达载体pcD-NA3.1(-)相应酶切位点,获得重组质粒pcDNA3.1(-)-SQR-Myc;采用脂质体法瞬时转染HEK293细胞并进行West-ern blot蛋白鉴定。结果显示:该研究已成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-SQR-Myc,质粒测序及酶切结果完全正确,并且SQR能够在HEK293细胞系中正常表达。
- 于峰祥于建宁王公金潘伟芹徐小波徐志伟花卫华刘泉
- 关键词：重组质粒真核表达
- SQR基因在大肠杆菌和乳酸菌中的表达被引量：2
- 2012年
- 为了研究硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因的乳酸菌表达载体pMG36e-SQR-Myc的构建及其在大肠杆菌DH5a和乳酸菌MG1363中的表达,通过限制性内切酶酶切大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pMG36e与目的片段SQR-Myc,回收纯化并用T4连接酶进行连接,连接产物通过KCM法转化到大肠杆菌DH5a中,提取所得到阳性大肠杆菌菌株质粒pMG36e-SQR-Myc进行双酶切鉴定与普通PCR鉴定;并通过电转化将重组质粒导入乳酸菌MG1363中,采用SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测SQR蛋白质在其中的表达情况。结果显示,SQR乳酸菌重组表达载体pMG36e-SQR-Myc被成功构建,目的蛋白质SQR在大肠杆菌和乳酸菌MG1363中被成功检测到。因此,乳酸菌MG1363可以用来表达硫化物-醌氧化还原酶(SQR)。
- 潘伟芹于建宁王公金徐小波于峰祥李燕
- 关键词：乳酸菌
- 乳酸乳球菌电转化方法的优化被引量：6
- 2013年
- 乳酸菌转化效率不高是制约其广泛应用的关键因素。为建立乳酸乳球菌的高效电转化方法,主要从电压、电阻、细菌生长时期及电击缓冲液等影响电转化的因素入手,根据每微克DNA获得的转化子的多少,评价乳酸乳球菌的电转化效率。结果显示:当电压为2.0 kV、电阻为400Ω、细菌处于对数生长中期、电击缓冲液为磷酸缓冲液时,电击乳酸乳球菌MG1363的转化效率最高,为1 300个/μg。表明通过优化电转化参数,可以提高乳酸乳球菌的转化效率,为拓展乳酸乳球菌的应用范围奠定基础。
- 于建宁宋小敬王公金潘伟芹徐小波于峰祥李燕
- 关键词：乳酸乳球菌电转化电压电阻
- 脂质体转染对小鼠肠上皮细胞的影响
- 2012年
- 小鼠肠上皮细胞(IEC)是一种快速更新的细胞,脂质体转染法是哺乳动物细胞转基因常用的转染方法。以IEC为研究对象,从转染前后细胞形态、细胞周期及染色体倍性等方面的变化研究脂质体转染对IEC的影响。结果显示,脂质体转染后形态不正常的细胞增多;细胞周期中G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05),以3代的细胞转染为例,由对照的62.4%增加到73.4%;S期同转染前相比显著降低(P<0.05),由20.4%降低至13.2%;然而从染色体倍性看,统计分析表明转染前后没有显著差异。从以上几个方面可以看出,脂质体转染对IEC产生了一定的负面影响。
- 李燕时小艳于建宁王公金徐小波陈哲于峰祥潘伟芹
- 关键词：脂质体细胞形态细胞周期染色体倍性
