耿慧武
- 作品数：17 被引量：23H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 通用转录因子GTFⅡF2对食管癌细胞增殖、迁移的影响
- 2016年
- 目的研究通用转录因子ⅡF多肽2(GTFⅡF2)的表达对食管癌细胞增殖及迁移的影响。方法人工合成靶向GTFⅡF2基因的siRNA序列和阴性对照siRNA序列及质粒pc DNA3.1-GTFⅡF2-FLAG,分别转染至食管癌细胞中,采用克隆形成实验和细胞划痕实验观察其对食管癌细胞增殖和迁移的影响。结果 RNA干扰技术靶向沉默GTFⅡF2基因表达后,食管癌细胞增殖和迁移均明显受到了抑制,而过表达GTFⅡF2对食管癌细胞的增殖和迁移无明显影响。结论GTFⅡF2基因在食管癌细胞TE-1、ECA-109的增殖和迁移过程中发挥重要作用,为进一步了解GTFⅡF2基因抑制TE-1、ECA-109细胞增殖和迁移的机制提供了基础。
- 陈丹丹耿慧武潘林鑫刘晓颖范礼斌
- 关键词：RNA干扰细胞增殖细胞迁移
- 人β4GalTⅡ基因在哺乳动物细胞株中的表达与定位
- 2015年
- 目的运用基因克隆技术构建人源β1,4-半乳糖转移酶Ⅱ(β4Gal TⅡ)真核表达质粒,并将其转染到COS7细胞中,观察蛋白在细胞内的定位,同时转染到HEK 293T细胞中检测其表达。方法分别设计带FLAG标签和GFP标签的β4Gal TⅡ基因的特异性引物,以含人β4Gal TⅡ全长c DNA序列为模板,定向构建到pc DNA3.1(+)及p CDGFP真核表达载体中,构建重组表达质粒。通过酶切和测序鉴定阳性重组质粒,利用Lipofectamine 2000分别转染COS7、HEK 293T细胞,免疫荧光显微镜观察重组蛋白在细胞内的定位,Western blot法鉴定重组蛋白的表达。结果成功构建pc DNA3.1-β4Gal TⅡ-FLAG和p CDGFP-β4Gal TⅡ重组表达载体,定位实验表明:β4Gal TⅡ-FLAG和GFP-β4Gal TⅡ二者在COS7细胞中均主要定位在细胞核周围,并有明显的块状染色,胞核中未见明显分布;Western blot法检测显示重组β4Gal TⅡ蛋白在HEK 293T细胞中稳定表达。结论获得了人β4Gal TⅡ的真核表达质粒,并能在COS7和HEK 293T细胞中表达,为进一步研究β4Gal TⅡ的功能及其与其他蛋白的相互作用奠定了一定基础。
- 徐雪琴潘林鑫耿慧武刘晓颖范礼斌
- 关键词：转染细胞定位蛋白表达
- FKBP25缺失突变体在细胞中的表达与定位
- 2014年
- 目的研究FKBP25缺失突变体蛋白在细胞内的表达和定位。方法以人FKBP25全长cDNA序列的质粒为模板,PCR方法分别扩增出FKBP25缺失突变体序列,然后插入真核表达载体pcDNA3.1中,通过Western blot方法和免疫荧光方法检测其在细胞株中的表达和定位。结果成功构建了FKBP25缺失突变体的真核表达载体,经Western blot检测FKBP25缺失突变体在HEK 293T细胞中能够有效表达,免疫荧光显微镜结果显示FKBP25缺失突变体在COS7细胞中分布于细胞核和细胞质。结论 FKBP25缺失突变体在HEK 293T、COS7细胞中能够表达,为了解FKBP25缺失突变体的功能提供了一定基础。
- 张姗靖王蓓华龚芮潘林鑫耿慧武刘晓颖邓松华范礼斌
- 关键词：基因表达免疫荧光细胞定位
- 人MT2A基因在哺乳动物细胞株中的定位与表达被引量：2
- 2013年
- 目的用基因克隆方法构建带FLAG-tag的人金属硫蛋白2A(MT2A)真核表达载体,用其转染HEK 293T,COS-7细胞观察MT2A在增殖细胞内的表达和定位。方法设计带FLAG-tag的引物,以人MT2A全长cDNA序列的质粒为模板,PCR法扩增MT2A全长序列,然后插入pCDNA 3.1中构建pCDNA 3.1-MT2A-FLAG质粒;将构建的质粒转染至HEK293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;脂质体法转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察MT2A表达的蛋白在细胞内定位。结果正确构建了pCDNA 3.1-MT2A-FLAG质粒;其在HEK 293T细胞中能有效地表达;免疫荧光实验表明在COS-7细胞中,MT2A主要分布在细胞质内。结论该研究结果为了解MT2A在细胞内与其他蛋白质相互作用及功能提供了一定的基础。
- 李新颖潘林鑫耿慧武刘君刘晓颖范礼斌
- 关键词：金属硫蛋白细胞定位转染免疫印迹
- Cystatin B及其突变体G50E、Q71P与CLIC1相互作用的初步研究
- 目的为研究cystatin B蛋白的生物学功能，构建酵母表达载体，进行酵母双杂交实验；构建带FLAG标签的cystatin B及其点突变体G50E、Q71P真核表达载体和带GFP标签的CLIC1真核表达载体，将各种质粒瞬...
- 耿慧武
- 关键词：酵母双杂交共定位蛋白质相互作用
- 文献传递
- 人COX6B1在哺乳动物细胞株中转染表达与定位的初步研究被引量：4
- 2012年
- 目的构建带FLAG标签的人野生型细胞色素氧化酶亚基COX6B1表达载体,转染至HEK 293T、COS7细胞观察COX6B1蛋白在细胞内表达与定位。方法以含人COX6B1全长cDNA序列的质粒为模板,通过上游带有FLAG标签的引物,PCR方法扩增出COX6B1全长序列,然后插入真核表达载体pCDNA3.1中构建pCDNA3.1-FLAG-COX6B1表达载体。将构建的质粒转染至HEK 293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位。结果成功构建了pCD-NA3.1-FLAG-COX6B1表达载体,其在HEK 293T细胞中能有效地表达;在COS7细胞中呈斑点状分布,且主要在胞质内分布,细胞核中未见其明显表达。结论 COX6B1在HEK293T、COS7细胞中均有表达,且主要分布在胞质内,这为进一步了解COX6B1的功能提供了一定的基础。
- 刘君耿慧武陈应炉刘晓颖范礼斌
- 关键词：基因表达转染细胞定位
- 人通用转录因子GTFIIF2表达与定位
- 2014年
- 目的构建不同标签的人通用转录因子IIF多肽2(GTFIIF2)表达载体,观察其细胞内的表达和定位。方法设计GTFIIF2的引物,以全长cDNA序列为模板,利用聚合酶链式反应技术扩增GTFIIF2全长序列,构建pcDNA3.1-FLAG-GTFIIF2和pCDGFP-GTFIIF2质粒,利用Western blot法和免疫荧光法检测其在细胞表达与定位;构建GST-GTFIIF2质粒,转化到BL21菌株,用IPTG诱导剂诱导融合蛋白表达,用SDS-PAGE分析诱导表达情况。结果免疫荧光法检测GTFIIF2蛋白集中分布在COS7细胞核中,在细胞质没有分布;pcDNA3.1-FLAG-GTFIIF2和pCDGFP-GTFIIF2质粒能够在HEK293T细胞中有效表达;GST-GTFIIF2在BL21菌株中很好的诱导表达。结论 GTFIIF2在COS7细胞、HEK293T细胞和BL21感受态细胞中能有效表达,为更好地了解GTFIIF2蛋白在细胞内的功能提供一定的研究基础。
- 赵健耿慧武乔正李春雨李克娟刘晓颖范礼斌
- 关键词：基因表达蛋白定位BL21
- 人RB1及其突变体的表达与定位被引量：6
- 2013年
- 目的研究人RB1及其缺失突变体蛋白在细胞内的表达与定位。方法以含人RB1全长cDNA序列的质粒为模板,通过PCR方法分别扩增出RB1全长及其三段缺失突变体序列,然后分别构建其表达载体,利用Western blot法和免疫荧光法检测其在细胞株中的表达与定位。结果成功构建了pCDNA3.1-FLAG-RB1及其缺失突变体的表达载体,Western blot法结果证明其在细胞中都能有效地表达,免疫荧光的结果显示了RB1主要分布在细胞核,但其缺失突变体在细胞质中也有分布。结论人RB1在HEK 293T、COS7细胞中均有表达,且主要分布在细胞核内,其缺失突变体在胞质中也有分布,这为进一步了解人RB1的功能提供了一定的基础。
- 潘林鑫李新颖徐南李克娟乔正耿慧武刘晓颖范礼斌
- 关键词：RB1转染基因表达细胞定位
- 人EBI3蛋白及其突变体的表达及定位研究被引量：1
- 2016年
- 目的 研究人EB病毒诱导的基因3（EBI3）及其突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位差异及其原因。方法 基于NCBI数据库中人EBI3氨基酸的序列分析,利用分子克隆技术构建人EBI3真核表达质粒pcDNA3.1-EBI3-FLAG、单独包含氨基端或羧基端Ⅲ型纤连蛋白（FN3）结构域的缺失突变体的表达质粒pcDNA3.1-EBI3（1~135）-FLAG和pcDNA3.1-EBI3（125~230）-FLAG以及第210位天冬氨酸（Asp）点突变体Asp210的表达质粒pcDNA3.1-EBI3-D210A-FLAG;Westernblot方法检测EBI3及其突变体在HEK293T细胞中的表达;免疫荧光实验观察人EBI3及各突变体在COS7细胞中的定位。结果 成功构建了下游携带FLAG标签的人EBI3及其突变体的真核表达质粒;Westernblot结果显示重组蛋白均能在HEK293T细胞中稳定表达;经激光共聚焦显微镜观察,EBI3及其缺失突变体在COS7细胞的表达位置发生明显变化。结论 人EBI3及其突变体真核表达质粒均能在HEK293T、COS7细胞中成功表达;人EBI3缺失突变体在COS7细胞中的定位发生明显变化,氨基端结构域可能在EBI3蛋白的正确定位中发挥重要作用;EBI3蛋白的第210位Asp的突变影响了其在细胞内的定位。
- 邢雪梅耿慧武潘林鑫刘泽宇姚亮邓欢欢刘晓颖范礼斌
- 关键词：质粒构建WESTERNBLOT免疫荧光
- RACK1突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位研究
- 2016年
- 目的根据活化蛋白激酶C受体1(RACK1)的蛋白结构,构建其缺失突变体的真核表达质粒,研究RACK1缺失突变体在真核细胞内的表达及定位改变。方法根据RACK1蛋白的结构域特点,以pc DNA3.1-RACK1-FLAG为模板,构建真核表达质粒pc DNA3.1-RACK1(51-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(93-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(135-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(180-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(219-317)-FLAG;Western blot检测上述重组质粒在HEK 293T细胞中的表达;免疫荧光技术检测RACK1的各缺失突变体在COS7细胞中的定位情况。结果成功构建了RACK1各缺失突变体的真核表达质粒;Western blot结果表明,除pc DNA3.1-RACK1(219-317)-FLAG外,其余缺失突变体在HEK 293T细胞中均有效表达;免疫荧光实验表明RACK1缺失突变体在COS7细胞中主要定位在胞质,细胞核中也有少量分布。结论成功构建了RACK1缺失突变体真核表达质粒,并在HEK 293T和COS7细胞中成功表达;在COS7细胞中不同缺失突变体的表达定位均有差异,与野生型的RACK1相比也有所不同,表明缺失不同的结构域后其在细胞中的定位表达也发生了改变。这为研究RACK1各结构域的功能提供了重要依据。
- 朱亮亮韩卢王蓓华耿慧武潘林鑫刘晓颖范礼斌
- 关键词：突变体质粒构建免疫荧光WESTERNBLOT
