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孙健: 作品数：12 被引量：11H指数：2; 供职机构：云南农业大学植物保护学院更多>>; 发文基金：云南省自然科学基金云南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

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同步检测百合斑驳病毒、百合无症病毒和黄瓜花叶病毒的方法: 本发明提供了一种同步检测百合斑驳病毒(LMoV)、百合无症病毒(LSV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的方法，属植物保护领域。其方案是，通过提取总RNA、多重RT－PCR以及电泳检测等步骤，在同一反应管及同一个热循环条件下对百...; 李凡孙健陈海如李正跃王钰丽刘云龙范静华姬广海孔宝华王扬杨斌蒋小龙白松蔡红胡先奇; 文献传递

同步检测百合斑驳病毒、百合无症病毒和黄瓜花叶病毒的方法: 本发明提供了一种同步检测百合斑驳病毒(LMoV)、百合无症病毒(LSV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的方法，属植物保护领域。其方案是，通过提取总RNA、多重RT-PCR以及电泳检测等步骤，在同一反应管及同一个热循环条件下对百...; 李凡孙健陈海如李正跃王钰丽刘云龙范静华姬广海孔宝华王扬杨斌蒋小龙白松蔡红胡先奇; 文献传递

云南番木瓜花叶病病原鉴定被引量：4: 2006年; 西双版纳、保山、楚雄以及玉溪等地的感病番木瓜叶片表现为花叶或褪绿,叶片畸形,果实表面布满不规则线纹、环纹及环斑等症状。对感病番木瓜材料进行了电镜观察,在电子显微镜下观察到800 nm左右的病毒粒子;设计PRSV特异性引物对感病番木瓜材料进行RT-PCR检测,获得的扩增产物和引物设计大小相符;利用双生病毒特异性引物没有检测到双生病毒。确定引起云南番木瓜花叶病的病原为番木瓜环斑病毒。; 孙健李凡王钰丽王海宁王崇德陈海如; 关键词：番木瓜环斑病毒病原鉴定

烟草扭脉病毒检测方法: 本发明提供一种烟草扭脉病毒检测方法，属植物保护领域。根据烟草扭脉病毒核苷酸序列设计的特异性引物TVCPF/TVCPR，提取植株组织的总RNA后，采用RT－PCR的方法，检测烟草扭脉病毒。该发明能有效克服指示植物法、电镜技...; 李凡王钰丽陈海如孙健蔡红吴建宇秦西云孔宝华兰平秀杨金广; 文献传递

烟草丛顶病毒检测方法: 本发明提供一种烟草丛顶病毒检测方法，属植物保护领域。根据烟草丛顶病毒核苷酸序列设计特异性引物TB2F/TB2R，提取总RNA后采用RT-PCR的方法，直接检测烟草丛顶病毒。本发明能有效克服指示植物法、电镜技术、酶联免疫技...; 李凡王钰丽陈海如孙健蔡红吴德喜程建勇杨根华马琨玲钱宁刚; 文献传递

检测李坏死环斑病毒的方法: 本发明提供了一种免疫捕获反转录PCR检测李坏死环斑病毒(PNRSV)的方法，属植物保护领域。其方案是，通过抗体特异捕获抗原、RT－PCR以及电泳检测等步骤，对植物中感染的李坏死环斑病毒进行扩增，并通过凝胶电泳进行分离和检...; 李凡陈精兰陈海如李正跃孙健王钰丽刘云龙范静华王扬姬广海孔宝华蔡红杨斌蒋小龙白松; 文献传递

百合斑驳病毒云南分离物全基因组序列分析及CP结构预测被引量：2: 2018年; 对云南嵩明百合上发生的百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMo V)进行全基因组序列测定及分析,并对LMo V嵩明分离物(LMo V-SMi1、LMo V-SMi2)和玉溪分离物(LMo V-YXi1、LMo V-YXi2)外壳蛋白(coat protein,CP)基因进行序列比较,发现云南的LMo V分为2个类群,玉溪分离物属于种群I,嵩明分离物属于种群II。2个类群间的核苷酸和氨基酸同源性分别为86.7%～89.5%、90.1%～92.7%,玉溪分离物和嵩明分离物相比,cp基因发生了3个核苷酸的缺失。对国内外LMo V所有分离物的cp基因氨基酸序列进行系统进化分析,结果表明所有LMo V分离物可划分为2个种群,种群I分离物较种群II分离物几乎均存在1个苏氨酸缺失的差异。此外,对LMo V-SMi2的CP相关特性和空间结构进行了初步预测,认为该蛋白为球状,具有较强的表面可能性,不存在跨膜区域,大多数区域能够形成主要的抗原决定簇,主要集中在aa12-22、aa31-42、aa83-99、aa179-191、aa215-223、aa249-259区段,可作为制备抗血清选择抗原的参考。LM o V-SM i2和LM o V-YXi1在二级结构和三级结构上存在一定的差异,但总体空间结构差异不大。; 李月月孙健谭冠林马琨玲李凡; 关键词：百合斑驳病毒基因组外壳蛋白

烟草扭脉病毒检测方法: 本发明提供一种烟草扭脉病毒检测方法，属植物保护领域。根据烟草扭脉病毒核苷酸序列设计的特异性引物TVCPF/TVCPR，提取植株组织的总RNA后，采用RT-PCR的方法，检测烟草扭脉病毒。该发明能有效克服指示植物法、电镜技...; 李凡王钰丽陈海如孙健蔡红吴建宇秦西云孔宝华兰平秀杨金广; 文献传递

烟草丛顶病毒检测方法: 本发明提供一种烟草丛顶病毒检测方法，属植物保护领域。根据烟草丛顶病毒核苷酸序列设计特异性引物TB2F/TB2R，提取总RNA后采用RT－PCR的方法，直接检测烟草丛顶病毒。本发明能有效克服指示植物法、电镜技术、酶联免疫技...; 李凡王钰丽陈海如孙健蔡红吴德喜程建勇杨根华马琨玲钱宁刚; 文献传递

侵染兰花引起坏死斑症状的病毒种类鉴定被引量：5: 2007年; 在昆明市文心兰栽培基地发现了具有病毒病症状的感病文心兰和大花惠兰植株。感病文心兰和大花惠兰样品在电镜下可观察到长约460-500 nm的线状病毒粒体和长约300 nm的杆状病毒粒体,它们分别与已报道的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒粒体大小一致。利用ELISA技术在感病文心兰和大花惠兰样品可以检测到建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒。利用建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的特异性引物,运用RT-PCR方法可以扩增到与引物设计预期大小一致的核酸条带。由此证明,云南文心兰和大花惠兰病毒病由建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒中的一种或两种侵染引起。; 王钰丽李凡李正跃?守鑫孙健赵瑞荣陈海如; 关键词：文心兰大花惠兰建兰花叶病毒齿兰环斑病毒