李艳
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中南大学湘雅三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技计划项目湖南省科技厅项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种小鼠睾丸细胞涂片的快速制备方法被引量：2
- 2014年
- 目的建立一种用于免疫荧光实验的小鼠睾丸细胞涂片的快速制备新方法。方法分别给出生后16、21、28 d和120 d的小鼠腹腔注射秋水仙素,3 h后取睾丸组织剔除白膜,分离曲精小管进行剪碎,加入冷PBS重悬细胞,过滤,并用冷PBS洗涤细胞3次,然后低渗处理,最后经多聚甲醛固定后铺片。对细胞核进行DAPI染色,并以21 d小鼠睾丸涂片为例进行免疫荧光实验,检测所制备的细胞涂片的质量。结果所制备的小鼠睾丸细胞涂片经DAPI染色,每张细胞涂片均分布大量生殖细胞,背景清晰,根据细胞核的大小与着色,可初步判断生殖细胞类型;用不同发育阶段小鼠所制备的睾丸细胞涂片,细胞分布类型有很大差异,其中28 d小鼠制备的睾丸细胞涂片中生殖细胞类型最多;以21 d小鼠睾丸细胞涂片为例进行免疫荧光实验,红色和绿色荧光标记的目标蛋白在精母细胞中表达清晰,背景干净,说明所制备的细胞涂片适合于免疫荧光检测。结论成功建立了一种快速制备小鼠睾丸细胞涂片的新方法。
- 杨梦左笑丛李艳黄利华邢晓为
- 关键词：小鼠睾丸细胞涂片免疫荧光技术精子发生
- 带Myc、His标签的SPAG4L真核表达载体的构建与表达被引量：4
- 2013年
- 为了获得带有His、Myc双标签的SPAG4L蛋白,建立能够稳定表达该蛋白的细胞系,本研究利用PCR技术从人睾丸cDNA中扩增SPAG4L开放阅读框,构建到pcDNA3.1(+)myc-his真核表达载体中进行测序和双酶切验证。将pcDNA3.1/myc-His(-)A/SPAG4L质粒和空白载体分别转染HeLa细胞,G418筛选后建立稳定转染细胞系。用Western blotting和免疫荧光技术对新建立的稳定转染细胞系进行检测。结果表明,成功扩增了SPAG4L基因,构建到pcDNA3.1/myc-His(-)A真核表达载体后,经酶切和测序验证所插入的SPAG4L序列完全正确;pcDNA3.1/myc-His(-)A/SPAG4L转染HeLa细胞后,经G418筛选后建立了稳定转染细胞系。Western blotting检测后发现,新建立的细胞系能够正确表达SPAG4L及其标签蛋白,进一步的免疫荧光实验发现,SPAG4L能够和内质网标签蛋白PDI共定位。研究结果所提供的稳定转染细胞系将为下一步进行免疫共沉淀和pull-down实验提供了有力的工具。
- 陈颜亮郑治王剑龙周晓哲李艳杨梦黄利华邢晓为
- 关键词：标签转染真核表达蛋白功能
