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徐英武: 作品数：20 被引量：33H指数：4; 供职机构：浙江农林大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划浙江省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生航空宇航科学技术更多>>

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雷竹SOC1蛋白原核表达及纯化: 2016年; 为了获得有活性的雷竹Pv SOC1蛋白（Phyllostachys violascens SUPPERSSOR OF CO OVEREXPRESSION 1）,并进一步讨论其结构形态,通过原核表达方法得到Pv SOC1的可溶性重组蛋白,以p ET-GST作为表达载体,大肠杆菌E.coli Rosetta作为宿主菌株,超表达全长和IKC结构域的雷竹Pv SOC1蛋白。发现在37℃条件下,菌液浓度D（600）值达到0.4-0.6时进行诱导,控制IPTG终浓度为0.4 mmol/L,诱导目的蛋白表达5 h,可以获得可溶的IKC结构域GST融合蛋白。采用TEV（tobacco etch virus protease）酶切技术、配合GST亲和层析柱及分子层析色谱柱,去除标签蛋白并纯化目的蛋白。所获得的高纯度IKC结构域Pv SOC1蛋白经过对比分析发现其以八聚体形式存在。; 汤叶根施泉林新春徐英武; 关键词：原核表达蛋白纯化

可用于多重检测的单链长探针的制法: 本发明公开了一种可用于多重检测的单链长探针的制法，包括：1）针对待检测的每种靶标设计下游鉴别探针；2）针对与待检测靶标无关的核酸序列，即填充物长序列的模板设计一对扩增引物，扩增引物对的上游特异性引物的5′端与步骤1）所得...; 徐英武汪平吕洪玉; 文献传递

基于长探针同时检测多种微量靶标的方法: 本发明公开了一种基于长探针同时检测多种靶标的方法，包括以下特征：1）获取待检测的靶标及其内参18S rRNA的核酸序列，再在每种待检测靶标及其内参18S rRNA的保守区设计紧密相连的两条寡核苷酸的鉴别探针；2）设计通用...; 汪平徐英武吕洪玉; 文献传递

绿竹SEP3-like蛋白表达纯化以及不同结构域互作研究被引量：3: 2016年; 在双子叶植物中,SEPALLATA3(SEP3)参与生殖生长的很多方面,包括花分生组织和花器官的形成。但是在单子叶植物中,花器官形成的分子机制还不清楚。为了揭示单子叶植物中SEP3蛋白的结构以及聚合体的形成与生物学功能的关系,以单子叶植物绿竹Bambusa oldhami为材料,构建绿竹SEP3(BoSEP3)蛋白不同结构域原核表达载体,在大肠杆菌中进行重组蛋白诱导表达,获得不同结构域的可溶蛋白,通过镍柱及分子筛分离纯化表明,BoSEP3蛋白K结构域以四聚体形式存在;同时构建BoSEP3蛋白不同结构域的酵母表达载体,通过酵母双杂交系统检验BoSEP3蛋白同源互作表明,K结构域有参与形成多聚体的功能。实验提供了一套表达纯化BoSEP3蛋白以及检验蛋白质互作的有效方案,为开展BoSEP3蛋白功能和结构生物学研究奠定了基础。; 吴文魁周佳平林新春徐英武曹友志; 关键词：蛋白质纯化酵母双杂交

利用酵母双杂交系统筛选雷竹SOC1相互作用蛋白: 2016年; 在雷竹（Phyllostachys violascens）中找到SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS1（SOC1）在开花途径中的作用靶标,进一步探索SOC1的作用机制。构建pGBKT7-Pv SOC1诱饵表达载体,通过SMART技术构建开花时期的雷竹cDNA文库,酵母双杂交筛选与SOC1互作的蛋白,并对其进行分析鉴定。结果显示,成功构建了可用于酵母双杂交的cDNA文库,文库的转化率为每微克pGADT7-Rec 3.0×10~6转化子,文库滴度为7.5×10~6 cfu/m L,插入片段主要在250-2 000 bp之间。通过酵母双杂交实验得到与诱饵蛋白PvSOC1相互作用的蛋白,筛选到的靶标蛋白经鉴定是一个富含亮氨酸的蛋白激酶,特征氨基酸序列在不同物种中非常保守,与水稻中的同源蛋白亲缘性最高。; 潘现飞施泉林新春徐英武曹友志; 关键词：雷竹 CDNA文库酵母双杂交

雷竹和拟南芥SOC1多聚体差异性分析: 2016年; MADS-box是一个超家族基因,可通过形成多聚体复合物实现对花发育的调控。其中SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CO1(SOC1)作为MADS-box家族的重要成员,对花形成时间起决定作用。作为转录因子蛋白,SOC1包含MADS,I,K和C 4个独特功能的结构域,发挥功能的过程中,其中K结构域能够调控同源或是异源蛋白多聚体的形成,I结构域能够稳定转录因子结合DNA的作用。在单子叶植物雷竹Phyllostachys violascens和拟南芥Arabidopsis thaliana中,开花时间模式上存在明显差异,前者开花时间不确定,后者是确定的。尽管不能直接推断这种现象与SOC1形成植物不同复合物相关联,但雷竹和拟南芥SOC1是否具有形成相同模式的复合物对于竹类植物开花时间的研究具有重要意义。以雷竹和拟南芥SOC1作为研究对象,通过酵母双杂交实验,重点分析SOC1在形成多聚体模式方面的差异性。结果表明:拟南芥SOC1能形成同源二聚体,并且可通过结构域是I和K区形成同源多聚体;而雷竹SOC1不能形成多聚体,但可以通过K结构域形成同源二聚体。因此,I结构域可能是引起拟南芥和雷竹SOC1多聚体状态不同的一个原因,这个结构域是否对开花定时起决定作用还有待进一步转基因功能验证。; 施泉陈晓沛林新春徐永汉徐英武; 关键词：植物学 MADS-BOX 雷竹拟南芥酵母双杂交

雷竹SOC1蛋白原核表达及纯化: PPERSSOR OF CO OVEREXPRESSION 1(SOC1)是含有MADS-Box结构域的转录因子.是四条成花途径的整合因子.为了揭示雷竹SOC1蛋白具有生物学功能时的结构形态,开展了雷竹BoSOC1蛋白质...; 汤叶根徐英武; 关键词：雷竹原核表达蛋白纯化多聚体

毛竹KDO8PS的原核表达纯化及晶体生长被引量：1: 2014年; 3-deoxy-D-manno-octulosonate(KDO)8-phosphate synthase(KDO8PS)[EC 4.1.2.16]是KDO生物合成途径中的关键酶。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,以毛竹Phyllostachys edulis新鲜实生苗为材料,分离得到竹子KDO8PS基因。通过对不同物种来源的KDO8PS进行氨基酸序列比对分析和半定量RT-PCR技术对该基因进行组织特异性表达分析。将PeKDO8PS基因构建入原核表达载体pET-28a,并在大肠埃希菌Escherichia coli原核表达系统中获得了KDO8PS的可溶性高表达。经nickel亲和层析和分子筛纯化2种方法对表达蛋白进行纯化。结果分析表明:该基因编码区全长876 bp,可编码291个氨基酸。PeKDO8PS与拟南芥Arabidopsis thaliana等植物来源的KDSA2的基因有很高序列一致性,而与微生物来源的KDO8PS序列一致性较低。分析毛竹各组织中KDO8PS基因的表达结果表明,该基因在根、茎和叶片中均有表达,但在根中相对表达量较高,此表达模式亦同拟南芥AtKDSA2类似。另外,发现KDO8PS在溶液(30 mmol·L-1Tris-HCl pH 8.0,200 mmol·L-1氯化钠)中以二聚体的形式存在,并且初步筛选出该酶晶体生长条件。此结果为PeKDO8PS蛋白的最终结构分析奠定了基础。; 张凤雪徐英武张智俊肖冬长王超莉屈亚平; 关键词：林木育种学毛竹组织特异性表达原核表达

绿竹花发育相关基因BoAP3的克隆与分析被引量：5: 2013年; MADS-box基因家族在决定花分生组织特性和花器官发育过程中起着重要的作用。以绿竹Bambusa oldhamii开花试管苗花芽为植物材料,采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术,获得了1条MADS-box基因家族的基因,命名为BoAP3。序列分析结果表明:BoAP3开放阅读框(open reading frame,ORF)长度为654 bp,编码218个氨基酸,具有典型的植物MADS-box蛋白结构,其编码肽链包含了MADS区、K区、I区和C区。BoAP3与小麦Triticum aestivum,水稻Oryza satva等AP3-like同源基因所编码的氨基酸同源性达到80%以上。定量聚合酶链式反应(PCR)结果表明:BoAP3基因在开花试管苗的花芽中表达量是不开花试管苗营养芽表达量的8.1倍,表明该基因可能参与了花器官的发育。; 朱龙飞徐英武林新春; 关键词：绿竹

酵母双杂交系统检测山核桃MADS蛋白间的相互作用: DS-box基因几乎遍布整个植物界,在植物花发育的整个阶段起到了极为关键的作用.MADS-box基因所编码的蛋白为MADS-box转录因子,以二聚体化的形式通过其保守结构域与特定的DNA序列相结合来调控基因的表达.MAD...; 侯传明汤叶根王正加徐英武; 关键词：山核桃酵母双杂交系统

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