曹慧
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：扬州大学医学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家科技型中小企业技术创新基金“十五”国家科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人B-CAM/Lu基因逆转录病毒载体的构建及其在L929细胞中的表达
- 2007年
- 目的克隆人B-CAM/Lu基因,构建其逆转录病毒表达载体,获得稳定高表达B-CAM/Lu的L929细胞株。方法RT-PCR技术克隆人B-CAM/Lu基因,并插入逆转录病毒载体pEGZ中,该重组逆转录病毒载体与pH456、pH460两个辅助病毒载体一起,共转染包装细胞293T,并感染L929细胞,经Zeocin筛选获得的细胞株通过RT-PCR、Western blot及间接免疫荧光鉴定细胞中B-CAM/Lu基因mRNA的转录和蛋白表达。结果成功获得人B-CAM/Lu基因,测序正确,亚克隆至逆转录病毒载体pEGZ后,经转染筛选,获得的抗性L929细胞株通过RT-PCR和Western blot分析,检测到B-CAM/Lu mRNA的转录和目的蛋白的表达,通过间接免疫荧光确定该蛋白定位表达在L929转基因细胞膜上。结论成功克隆并构建了人B-CAM/Lu基因的重组逆转录病毒表达载体,获得稳定高表达B-CAM/Lu蛋白的L929细胞株,为将其作为免疫源,制备B-CAM/Lu单抗用于镰刀型红细胞病及一些肿瘤疾病的检测诊断打下了基础。
- 陈琦曹慧高哓飞张海燕王芬李厚达
- 关键词：L929逆转录病毒载体
- 共刺激分子配体B7-DC基因真核表达载体和转基因细胞的构建
- 2006年
- 目的:克隆小鼠B7-DC基因,并构建含该基因的真核表达载体pEF6/-B7-DC-V5His,证明该基因在CHO细胞中的表达方式,为建立B7-DC的转基因小鼠打下基础。方法:从小鼠胸腺中抽提总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增出B7-DC编码区片段。按常规方法克隆进pEF6V5His载体中,重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞,48小时后进行间接免疫荧光实验,72小时后用blasticidin进行筛选,挑选出能稳定表达B7-DC的细胞株。结果:已成功克隆小鼠B7-DC基因并构建了用于表达B7-DC基因的真核表达载体,经间接免疫荧光实验(IFA)证明,该基因在CHO细胞中得到表达。经Western blot检测表明筛选出的转基因细胞稳定表达了B7-DC基因。结论:构建了用于表达B7-DC基因的真核表达载体pEF6/-B7-DC-V5His,并能在CHO细胞中稳定表达目的基因,为该基因功能的后续研究奠定了基础。
- 岳挺孙强章蓉曹慧刘进董娟李厚达
- 关键词：共刺激分子真核表达
- 一种鉴定MNSs红细胞血型单克隆抗体类型的方法的建立
- 2007年
- 为鉴定MNSs血型单克隆细胞株6D7C9分泌的抗体类型,通过克隆、亚克隆、细胞转染等分子生物学技术建立了血型糖蛋白GPA、GPB的异源表达系统,并将其作为抗原,通过ELISA、Western印迹法确定6D7C9分泌的McAb.结果显示,RT-PCR技术成功克隆获得了GPA、GPB血型糖蛋白编码基因,通过分别构建其重组逆转录病毒表达载体pEGZ/GPA及pEGZ/GPB,转染包装细胞293T,再感染L929细胞,经zeocin筛选2周后,RT-PCR及流式细胞仪分析证实,L929/GPA和L929/GPB转基因细胞中分别有GPA、GPB目的基因的转录和蛋白表达.用稳定高表达GPA、GPB的转基因细胞通过ELISA和Western印迹法证实单克隆细胞株6D7C9分泌的是抗GPA/GPBMcAb.本研究成功地建立了血型糖蛋白GPA、GPB的异源表达系统,为MNSs血型McAb的检测及GPA、GPB蛋白的功能学研究奠定了基础.
- 陈琦曹慧张海燕高晓飞李厚达
- 关键词：血型糖蛋白A单克隆抗体基因表达
- 卵巢移植技术应用于胰腺癌转基因小鼠模型繁殖传代研究被引量：3
- 2006年
- 目的研究卵巢移植在胰腺癌转基因小鼠模型保种传代中的应用。方法通过显微手术将SV40T阳性转基因小鼠的卵巢原位移植给相同背景品系去除卵巢的正常FVB雌鼠体内。移植后与正常FVB雄鼠配种,后代以PCR检测确定阳性,统计后代发病情况。并对移植受体鼠进行卵巢的组织切片观察。结果实验中移植用供体鼠19只。成功移植给32只受体。其中有21只移植受体怀孕产子,得到后代159只,存活96只,PCR检测阳性34只,阳性率约为25.4%。结论卵巢移植可被用于转基因小鼠的传代繁殖保种。
- 刘英孙强王光凤刘进郑逸梅董娟曹慧刘全海李厚达
- 关键词：小鼠转基因卵巢繁殖连续传代
