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膜杂交多重检测技术在HPV基因分型中的应用被引量：15: 2006年; 目的应用膜杂交多重检测技术进行人乳头瘤病毒（HPV）基因分型诊断，以了解HPV亚型的感染状况。方法采用膜杂交多重检测技术对深圳地区不同年龄段就诊妇女4419例进行23种HPV基因亚型检测。结果4419例标本共检出HPV亚型感染阳性者897例，阳性率为20．3％；其中高危型感染649例，低危型感染183例，混合感染65例，分别占总阳性的72.4％，20．4％和7．2％。不同年龄组的HPV亚型感染检出率差异明显，〈20岁，20～35岁，36～50岁和〉50岁年龄组的HPV亚型感染阳性率分别为2.3％，70．1％，22．0％，5．6％；各年龄组低危型和高危型感染阳性率分别为0．9％和1．4％，17、0％和53．1％，5、3％和16、7％，0和5．6％。结论膜杂交多重检测技术在HPV感染基因分型中的应用具有高度特异性、敏感性，可为临床HPV感染诊断和宫颈癌的监测及预防提供可靠的实验依据。; 吴意陆学东刘键黄烈黄晓丽徐韵靖; 关键词：人乳头瘤病毒基因分型宫颈癌

深圳地区秋冬季婴幼儿病毒性腹泻病原分析被引量：15: 2009年; 目的分析了解深圳地区秋冬季婴幼儿腹泻标本中轮状病毒、诺如病毒、星状病毒，肠道腺病毒4种主要急性胃肠炎病毒的感染情况。方法收集深圳地区多家医院2007年10月—2008年2月腹泻患儿粪便标本192份，分别采用ELISA检测4种病毒抗原及采用PCR技术检测病毒核酸，阳性标本的PCR产物经纯化、测序加以验证，并比较2种方法应用效果。结果ELISA和PCR从192份标本共检出病毒156例，检出率为81．3％（156／192），4种病毒的阳性率分别为轮状病毒62．0％（119／192），诺如病毒17．7％（34／192），肠道腺病毒16．7％（32／192），星状病毒3．1％（6／192），其中混合感染率为16．7％（32／192）；ELISA技术和PCR技术对4种病毒的检出率分别为轮状病毒52．6％和50．5％（X^2=0．4，P〉0．05），诺如病毒8．3％和12．0％（X^2=1．24，P均〉0．05），肠道腺病毒7．3％和11．5％（X^2=1．75，P〉0．05），星状病毒1．6％和2．1％（X^2=0，P〉0．05），2种方法检出率的差异无统计学意义（，值分别为0．4、1．24、1．75及0，P均〉0．05）；2种方法对轮状病毒的检测具有较好的一致性（Kappa值为0．58），对诺如病毒、肠道腺病毒和星状病毒的检测一致性较差（Kappa值分别为0．18、0．15和0．27）。结论轮状病毒仍是深圳地区婴幼儿秋冬季腹泻的最主要病原，其次为诺如病毒和肠道腺病毒，病毒混合感染比例较大。ELISA与PCR技术在对诺如病毒、肠道腺病毒和星状病毒的检测上具有互补性，联合应用可提高诊断率。; 王琼邱羽曾凡胜杨来智黄烈刘键陆学东; 关键词：腹泻病毒性疾病酶联免疫吸附测定聚合酶链反应

结核杆菌耐药基因芯片在结核性胸膜炎中的应用: 目的探讨结核性胸膜炎患者结核杆菌的耐药基因突变情况及其对疗效的影响.方法结核性胸膜炎患者行纤支镜代胸腔镜检查,胸膜活检标本行结核分枝杆菌耐药基因芯片检测,留置胸腔引流管,常规抗痨治疗.; 陈小可周一平高秋霞刘键刘慧夏利萍李艾芬

葡萄球菌大环内酯类耐药基因检测及其意义被引量：4: 2006年; 目的了解葡萄球菌对大环内酯类药物表型耐药性和耐药基因以及分析大环内酯类耐药基因与诱导克林霉素耐药的相关性。方法用K—B纸片法检测2004—2005年分离的136株葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性，依据NCCLS2004年发布M100-S14的D-试验方法，测定红霉素对克林霉素的诱导耐药率；应用聚合酶链反应（PCR）法检测MsrA、Vgb、Sat4、ermA、ermB、ermC、mphA、MefA／E、ereA、ereB10种耐药基因。结果136株葡萄球菌共栓出MsrA、Sat4、ermC、mphA、ereB5种耐药基因，耐药基因总检出率为80，15％（109／136）。MRSA、MRCNS、MSSA、MSCNS耐药基因的检出率分别为81．25％（13／16）、89，47（68／76）、73，08％（19／26）、50，00％（9／18），耐药基因主要存在于MRCNS。葡萄球菌对红霉素和克林霉素同时耐药株占43．38％，红霉素耐药而克林霉素敏感株占37，50％；D-试验阳性率为25，00％（34／136），阳性株数占红霉素耐药而克林霉素敏感株的66，67％（34／51）。耐药基因MsrA、Sat4、ermC、mphA、ereB的阳性率分别为24．26％、41．91％、56，62％、1．47％、18．38％，其中核糖体甲基化酶基因ermC是诱导克林霉素耐药的主要基因。结论ermC是诱导克林霉素耐药的主要基因，临床微生物实验室应同时开展D试验和耐药基因检测，以指导临床更加合理使用抗菌素。; 林广城黄烈刘键韦洁宏杨来智陆学东; 关键词：葡萄球菌红霉素克林霉素耐药基因诱导耐药

HIV-1 gag基因p17+24重组抗原表达、纯化及抗原性分析: 2007年; 目的获得HIV-1型gag基因p17＋2，4重组抗原，分析其免疫原性和探讨开发诊断试剂的可能性。方法采用PCR技术扩增HIV-1gag基因p17＋p24核酸片段，并克隆入pTreHis2A表达质粒，在大肠杆菌BL21（DE3）株中表达。用Ni—NTA金属螯合层析法纯化目的蛋白，并用免疫印迹法分析纯化蛋白的抗原特异性。结果重组质粒在BL21（DF3）菌株中经IPm诱导表达一个相对分子质量（肘，）约为51×10^3的融合重组蛋白，重组蛋白经HIV-1p17、p24抗原单克隆抗体鉴定，具有抗原特异性。25份HIV阳性血清、180份HIV阴性血清标本初步经l临床验证，具有较高的检出敏感性和特异性。结论成功构建HIV-1型gag基因p17＋24抗原表达载体，表达纯化的p17＋24重组抗原具有较好的抗原性，可用于诊断试剂的开发。; 陆学东张银辉崔素文杨来智曾青卿刘键张小艳; 关键词：GAG基因重组抗原

MRFQ SYBR Green I-PCR结合融解曲线快速检测产ESBLs菌耐药基因被引量：1: 2009年; 目的探讨SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法快速检测常见超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因的可行性。方法选取经测序验证携带有tem、shv、ctx-m-1组、ctx-m-9组耐药基因的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌作为阳性菌株,建立细菌耐药基因SYBR Green I实时荧光定量多重PCR检测体系,这四种耐药基因的扩增产物片段长度和融解温度(Tm值)都不同,可通过结合融解曲线分析加以区别。用此体系检测110株大肠埃希菌和94株肺炎克雷伯菌,根据特异性Tm值的有无和差别判断是否携带有耐药基因及携带耐药基因型别,结果与耐药表型、琼脂糖电泳、测序结果对照。结果经SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析,分别有47株(42.7%)大肠埃希菌和34株(36.2%)肺炎克雷伯菌携带有这四种常见的ESBLs耐药基因,与表型确证实验和电泳结果比较达到100%的一致性;根据Tm值的不同,对耐药基因进行鉴别,携带单个耐药基因菌株的检测与电泳结果和测序结果比较达到100%的一致性;对携带多个耐药基因菌株的检测不能达到较好的分辨性。结论SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法可以快速筛查常见超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因,对携带单个耐药基因的细菌的基因型能进行准确鉴定。这对指导临床医生合理使用抗生素进行临床治疗和对耐药细菌的流行病学监测具有重要价值。; 夏成静陆学东黄烈刘键杨来智王琼; 关键词：SYBR

耐药细菌DNA提取试剂的评价被引量：1: 2008年; 目的评价常用细菌DNA提取试剂盒的性价比，筛选一种灵敏度较高、操作简单、价格合理的试剂。方法选取经测序确认的携带耐药基因的四种临床常见致病菌，经麦氏比浊仪比浊配制成一系列浓度的生理盐水菌悬液，分别用四种市售DNA提取试剂盒提取不同浓度菌悬液的DNA，经PCR扩增后电泳检测是否有耐药基因，比较四种试剂盒的优劣。结果国产DNA fast 200kit提取DNA的灵敏度可达到10^7-10^6 CFU的菌量，TIANamp Bacteria DNA Kit的灵敏度可达到10^7-10^6 CFU，AxyPrep^TMBacterial Genomic DNA Miniprep Kit的灵敏度可达到10^8CFU，QIAamp DNA Mini Kit的灵敏度可达到10^6-10^5CFU。结论比较四种试刺盒，QIAamp DNA Mini Kit试刺盒提取细菌DNA的灵敏度较高，适于细菌感染浓度较低标本的DNA提取，DNA fast200试剂盒操作最简便实用，并且价格便宜。; 夏成静陆学东黄烈刘键杨来智王琼; 关键词：细菌 DNA提取灵敏度 PCR

P63、P504S和Survivin 3种标志物在前列腺病变组织中的表达被引量：3: 2007年; 吴意尹利华陆学东黄维加肖晓友刘键; 关键词：P63 P504S SURVIVIN

溶血葡萄球菌对抗生素耐药表型与耐药基因的相关研究被引量：10: 2006年; 目的了解溶血葡萄球菌生物耐药与耐药基因的符合情况,分析耐药基因存在与耐药诱导的关系。方法对34株溶血葡萄球菌采用K-B纸片法测定10种抗生素耐药的情况,以PCR法检测细菌6种耐药基因。结果34株溶血葡萄球菌对米诺环素敏感率为91.18%;erm、mecA、aph(3′)-Ⅲ、aac(6′)/aph(2″)4种耐药基因的基因检出率>40%,携带耐药基因的生物敏感株诱导耐药率>60%。结论溶血葡萄球菌有潜在耐药性,菌株耐药基因的检测对临床医生的用药选择具有帮助。; 陆学东黄烈丘仲柳刘键张银辉糜祖煌; 关键词：溶血葡萄球菌耐药性耐药基因

多种呼吸道病原微生物快速筛查技术的建立被引量：25: 2008年; 目的解决临床急性呼吸道感染病原微生物快速筛查诊断的难题,建立一种能同时快速检测多种病原体的有效方法。方法采用多重PCR与Luminex xMAP多重分析技术平台相结合,以荧光微球为检测载体,建立快速、多重检测DNA或RNA技术平台。结果经14种(18个亚型)常见呼吸道病原微生物标准株检测,在反应体系中多重PCR产物只与相应的病原菌检测微球杂交,无非特异性反应;通过138例临床标本检测验证,肺炎患者支气管肺泡灌洗液标本中,细菌检出率占总病原微生物的37.68%,其中结核分枝杆菌占18.84%;病毒检出率占总病原微生物的44.93%,支原体、衣原体占17.39%;患者支气管肺泡灌洗液和鼻咽拭子标本中流感病毒A型的检出率分别为18.75%和26.92%。结论多重检测技术平台对急性呼吸道感染疾病的病原微生物快速检测具有实用价值,尤其在解决流行病病原学分析方面具有重要意义。; 陆学东周一平杨来智刘键韦洁宏黄烈韩健; 关键词：呼吸道感染病原微生物多重PCR

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刘键

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