安薇
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：广州医学院第一临床学院医学检验系更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人脂联素球状结构域基因的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2011年
- 目的:构建人脂联素球状结构域(gAd)基因的原核表达载体PET-28a(+)-gAd,诱导表达并纯化重组gAd蛋白,制备多克隆抗体。方法:以人基因组为模板,用PCR方法扩增人脂联素球状结构域(gAd)基因,构建原核表达载体PET-28a(+)-gAd,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经SDS-PAGE,免疫印迹法检测并鉴定表达产物,表达的目的蛋白用镍亲和层析柱纯化后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果:原核表达载体PET-28a(+)-gAd转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,获得gAd重组蛋白,免疫印迹证实能与抗his标签检测抗体结合,制备的多克隆抗体经间接ELISA法测得效价为1∶32 000。免疫印迹证实,抗血清不仅能特异性地识别gAd蛋白,还能识别脂联素蛋白,而不与非特异性蛋白结合。结论:成功构建原核表达载体PET-28a(+)-gAd,并表达、纯化重组蛋白gAd,制备的多克隆抗体特异性好,效价较高,为进一步的研究奠定了基础。
- 安薇徐霞
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 人脂联素球状结构域基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的利用杆状病毒表达系统表达人脂联素球状结构域(gAd)基因。方法以人基因组为模板,PCR法扩增人gAd基因,将gAd基因与供体质粒pFastBacHTB连接,转化含有穿梭载体Bacmid的大肠杆菌DH10Bac。筛选转座成功的重组穿梭载体Bacmid-gAd,通过脂质体介导,转染昆虫细胞Sf9,经SDS-PAGE、免疫印迹法检测表达产物。结果重组杆状病毒感染的Sf9细胞形态变化明显,SDS-PAGE电泳结果显示,Bacmid-gAd组和对照组相比,在相对分子质量15000～25000之间多出一清晰的蛋白条带,免疫印迹法证实该条带能与相应的抗His标签抗体结合。结论人gAd基因成功在真核细胞中表达,为后续的实验研究奠定了基础。
- 安薇徐霞
- 关键词：杆状病毒昆虫细胞SF9
- 人脂联素球状结构域基因的真核、原核表达及多克隆抗体的制备
- 研究目的
利用杆状病毒表达系统表达出有生物学活性的人脂联素球状结构域/(globular domain of adiponectin,gAd/)蛋白,为研究gAd蛋白在糖尿病、心血管疾病、子痫等疾病中的作用机制奠...
- 安薇
- 关键词：杆状病毒昆虫细胞SF9原核表达多克隆抗体
- 文献传递
- 头孢西丁和拉氧头孢低密度菌落法检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌
- 2009年
- 目的评价头孢西丁和拉氧头孢低密度菌落法检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的可靠性和临床实用性。方法临床收集的93株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS),按法国生物学会(CASFM)推荐的头孢西丁和拉氧头孢30μg低密度菌落法检测MRCNS,并与mecA基因PCR扩增法进行比较。结果以mecA基因PCR扩增法为金标准,其中MRCNS56株(阳性率60.2%),低密度菌落法头孢西丁的敏感性和特异性分别为94.6%和100%,拉氧头孢的敏感性和特异性分别为100%和97.3%。结论头孢西丁和拉氧头孢低密度菌落法是鉴定异质性MRCNS的良好方法。
- 唐晓华潘树根江镜全安薇徐霞
- 关键词：耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌头孢西丁拉氧头孢
