付永锋
- 作品数：4 被引量：33H指数：3
- 供职机构：中国海洋大学海洋生命学院更多>>
- 发文基金：青岛市科技发展计划项目教育部留学回国人员科研启动基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 家兔(Oryctolagus curiculus)角膜内皮细胞系的建立被引量：3
- 2007年
- 为了建立兔角膜内皮(RCE)细胞系,以家兔角膜为实验材料对RCE细胞的体外培养及其细胞系的建立进行了研究.取活家兔角膜,采用内皮面朝下进行贴板培养,并利用时间梯度连续揭膜法筛选出仅含有纯净RCE细胞的培养孔,收集纯一的RCE细胞悬浮于含有硫酸软骨素氧化降解物、牛眼生素、表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、家兔角膜基质细胞培养液、羧甲基壳多糖、N-乙酰葡萄糖盐酸盐和氨基葡萄糖盐酸盐的DMEM/F12培养液(20%胎牛血清)中,置CO2培养箱中启动原代培养.启动培养的RCE细胞呈四角形或多角形,3周后即可长成单层.在随后的继代培养中,RCE细胞的形状逐渐由多角形变为成纤维样.RCE细胞生长状态稳定,现已被传至67代,已经建成了一个新的连续性RCE细胞系.经鉴定,该细胞系细胞的群体倍增时间约为53.8h;第67代培养细胞的特征性染色体数目为44条,但出现了染色体的非整倍性.综合特征性染色体数目、抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体的免疫细胞化学染色、血管内皮生长因子(VEGF165)实验和形态回复实验的研究结果,证明该细胞系确为家兔角膜内皮细胞系,为哺乳动物角膜内皮细胞的理论研究及人造角膜内皮的研制奠定了基础.
- 樊廷俊赵君付永锋丛日山郭瑞超刘万顺韩宝琴于秋涛王晶
- 关键词：角膜内皮细胞细胞系染色体数目神经元特异性烯醇化酶家兔
- 大菱鲆鳍细胞系的建立被引量：27
- 2007年
- 建立大菱鲆（Scophthalus maximus）鳍细胞系,文中采用胰蛋白酶、透明质酸酶和Ⅱ型胶原酶消化法启动大菱鲆鳍组织的原代培养,并通过培养液配方和培养条件的优化成功进行大菱鲆鳍细胞的继代培养。研究结果显示,在pH=7.0-7.4、温度20-24℃的培养条件下,培养于含有表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、羧甲基壳多糖、N-乙酰葡萄糖盐酸盐的Leibovitz-15培养液（20%胎牛血清）中的大菱鲆鳍细胞,其生长分裂状况最好,细胞形态为成纤维细胞样。经继代培养后,细胞生长分裂依然十分旺盛,第60代大菱鲆鳍细胞系的群体倍增时间为62.4 h,虽然出现了染色体的非整倍性,但其特征性染色体仍为44条。该细胞系细胞经液氮冻存后仍保持有原有形态和较高存活率。现已成功建立了连续性大菱鲆鳍细胞系,目前已传至第65代。该细胞系的建立对于查清病毒对大菱鲆细胞的感染途径与感染机理等具有重要的理论意义,对于病毒疫苗研制具有重要应用价值。
- 樊廷俊耿晓芬丛日山姜国建于秋涛付永锋王晶于苗苗杨秀霞吴建东
- 关键词：大菱鲆原代培养传代培养细胞系
- 牙鲆孵化酶的分离纯化及其部分生物化学性质研究被引量：3
- 2008年
- 利用凝胶过滤柱层析和阴离子交换柱层析技术,从牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎孵化液中分离纯化出了大小约为34.8ku的牙鲆孵化酶。该酶卵膜裂解的最适反应温度为35℃,最适pH为7.0;对底物酪蛋白的米氏常数Km值为1.53mmol/L。该酶对丝氨酸蛋白酶和胰蛋白酶的特异性抑制剂非常敏感,而对其他蛋白酶抑制剂不敏感,表明该酶极可能是一种丝氨酸蛋白酶类型的胰蛋白酶。此外,该酶可浓度依赖性地被EDTA所抑制,被Cu2+所强烈抑制,被Ca2+和Mg2+所激活,对Zn2+则不敏感,表明该酶很可能是一种金属蛋白酶。
- 史振平樊廷俊丛日山汤志宏汪小锋付永锋
- 关键词：孵化酶丝氨酸蛋白酶金属蛋白酶
- 人角膜内皮细胞系的建立
- 建立人角膜内皮细胞系,本文以人角膜为材料对其角膜内皮细胞的体外培养及其细胞系建立进行了研究.从眼库获取人眼角膜片,采用内皮面朝下贴板培养和时间梯度连续贴膜法,筛选出仅含有纯净角膜内皮细胞的培养孔,收集角膜内皮细胞悬浮于含...
- 樊廷俊郭瑞超付永锋王晶赵君刘万顺丛日山汤志宏韩宝琴于秋涛
- 关键词：染色体数目
