丁兰萍
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 供职机构：郑州大学基础医学院基础肿瘤学教研室更多>>
- 发文基金：国家教育部“211”工程河南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 恶性肿瘤病因研究进展被引量：6
- 2003年
- 于慧宋爱云丁兰萍宫亚欧
- 关键词：恶性肿瘤免疫功能肿瘤细胞生物学
- 人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建被引量：3
- 2005年
- 中图分类号Q782摘要目的:构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达。方法:用RTPCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEMTEasy连接,转化感受态大肠杆菌JM109,经蓝白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落,用EcoRⅠ酶切获取目的片段,并与EcoRⅠ酶切过的pGEX4T-1质粒连接,重组子转化BL21感受态大肠杆菌,PCR扩增筛选出阳性菌落。基因测序并用Omega2.0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性。通过诱导pGEX4T1融合蛋白表达,用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Westernblot鉴定,薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量。结果:PCR扩增等方法证实,人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功,其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98.73%,氨基酸序列同源性为99.68%。Westernblot检出GST-hTERT融合蛋白,其表达量达28.4%。结论:成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达。
- 张巧赵国强刘红梅宫亚欧丁兰萍薛乐勋杨胜利
- 关键词：人端粒酶逆转录酶原核表达载体重组质粒
- pcDNA3．1-hTERT真核表达载体的构建及其抗肿瘤效应被引量：1
- 2008年
- 目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)真核表达载体pcDNA3.1-hTERT,并观察其对荷瘤小鼠的抗肿瘤效应。方法:用RT-PCR方法扩增出带有HindⅢ,BamHⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEM-TEasy克隆载体连接,筛选出阳性克隆,酶切获得目的片段,与pcDNA3.1载体连接,构建pcDNA3.1-hTERT表达载体。将真核表达载体pcDNA3.1-hTERT注射移植性H22肝癌模型C57BL/6小鼠,并设PBS组及转染空质粒pcDNA3.1组,观察3组的抗肿瘤效应。结果与结论:成功构建pcDNA3.1-hTERT真核表达载体。该载体中的hTERT基因片段全长为951 bp,可编码相对分子量为37 000、由317个氨基酸构成的多肽。该基因片段与GenBank公布的相应基因进行同源性比较,核苷酸序列的同源性为98.73%,编码产物的氨基酸序列的同源性为99.68%。该真核表达载体免疫荷瘤小鼠后,pcDNA3.1-hTERT组肿瘤生长受到抑制,且该组生存期分别长于PBS组及pcDNA3.1组(P<0.05);pcDNA3.1-hTERT组的IL-2、IFN-γ细胞因子水平也均高于PBS组与pcDNA3.1组(P<0.05)。提示该真核表达载体在受试动物体内可有效地诱导特异性抗肿瘤免疫应答。
- 张巧钱丽丽刘红梅赵国强宫亚欧丁兰萍杨胜利
- 关键词：人端粒酶逆转录酶荷瘤小鼠抗肿瘤免疫应答
