高翔
- 作品数：10 被引量：47H指数：3
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省高等学校基本科研业务费项目甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 一种新的动物传染病——马麝病毒性出血症被引量：3
- 2018年
- 马麝（Moschus chrysogaster,Alpine Musk Deer）是中国特有的一种麝属动物资源,属于世界自然保护联盟（IUCN）＂濒危＂级野生动物。其主要分布于青藏高原及周边区域,包括青海、宁夏贺兰山、甘肃祁连山及肃南山地、四川西部地区、云南北部高山地区及西藏东南部,其中以甘肃兴隆山马麝种群密度较大。20世纪90年代初,兴隆山国家自然保护区建立了中国第一个马麝人工驯养基地。
- 包世俊邢小勇丁小琴高翔安凯伏小平薛慧文
- 关键词：病毒性出血症
- 牦牛LC3B蛋白多克隆抗体制备及在生殖器官表达检测中的应用被引量：2
- 2023年
- 旨在克隆牦牛微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B,LC3B)基因,制备牦牛LC3B多克隆抗体,为探究自噬在牦牛生殖生理过程中的作用奠定基础。本研究通过基因克隆方法获得牦牛LC 3B基因序列,利用原核表达、亲和层析法纯化牦牛LC3B重组蛋白,使用纯化的蛋白为抗原免疫10月龄日本大耳白兔,Sepharose4B柱层析法纯化制备牦牛LC3B多克隆抗体,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价,并使用蛋白质免疫印迹(WB)、免疫组织化学法(IHC)和免疫荧光技术(IF)检测牦牛生殖器官中LC3B蛋白的表达。结果显示,本研究成功克隆了牦牛LC 3B基因(登录号:OP572227),构建的重组质粒pET-32a-LC3B能够诱导产生重组蛋白,并且在包涵体和上清中均有表达;所纯化的牦牛LC3B重组蛋白大小为34 ku(含Trx和His标签),符合预期结果。通过免疫日本大耳兔后得到的兔抗牦牛LC3B蛋白血清,抗体效价分别为1∶640000和1∶320000,特异性良好,表明牦牛LC3B蛋白多克隆抗体制备成功。纯化后的抗体应用于牦牛生殖器官中LC3B的表达检测,LC3B在牦牛卵巢、输卵管和子宫中表达,并且能识别LC3B-Ⅰ和发生脂化后的LC3B-Ⅱ,主要表达于细胞质及细胞核周。本研究通过成功克隆牦牛LC 3B基因制备了牦牛LC3B多克隆抗体,使用抗体检测发现LC3B蛋白在牦牛生殖器官中均有表达,表明所制备的多克隆抗体特异性良好,能够应用于牦牛LC3B蛋白的检测和细胞自噬水平的研究。
- 焦正兴潘阳阳王萌王萌马文斌高翔张晖高翔余四九崔燕
- 关键词：牦牛原核表达多克隆抗体生殖
- 牦牛ATG5多克隆抗体的制备及应用
- 2023年
- 为了进一步研究自噬在牦牛生殖活动中发挥的作用,本研究通过合成牦牛自噬相关5(autophagy related 5,ATG5)基因,并将合成的基因插入pET-32a质粒,转化BL21(DE3)感受态细胞,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导表达ATG5重组蛋白并纯化,免疫日本大耳白兔,制备牦牛ATG5多克隆抗体。采用间接ELISA法检测抗体的效价,蛋白质印迹(Western blot,WB)技术检测多克隆抗体的特异性。通过Western blot、免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)和免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)应用所制备的抗体检测ATG5蛋白在牦牛生殖器官中的表达。结果成功构建了pET-32a-ATG5原核表达质粒,转化大肠杆菌IPTG诱导获得了大小约为53 kDa(含His和Trx标签)的重组蛋白;制备的牦牛ATG5多克隆抗体效价为1∶1280000,特异性良好。应用显示,ATG5蛋白在牦牛睾丸和输卵管中均有表达。本研究成功制备了牦牛ATG5多克隆抗体,特异性良好,可用于检测牦牛ATG5蛋白的表达,为进一步研究自噬在牦牛生殖生理活动中发挥的作用积累了材料。
- 高翔潘阳阳王萌王萌王靖雷马文斌王军乾余四九崔燕余四九
- 关键词：牦牛原核表达多克隆抗体自噬
- 牛源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及遗传进化分析被引量：28
- 2016年
- 为了对兰州市榆中县某奶牛场犊牛疑似肺炎克雷伯氏菌感染病例进行确诊,本研究采集病死犊牛的脏器组织并从中分离到1株革兰阴性短杆菌,进而对分离菌进行了生化鉴定、16S r RN A鉴定及khe基因鉴定,在此基础上,完成了分离菌的致病性试验、耐药性分析及主要毒力基因的遗传进化分析。结果显示,除H2S试验外,分离菌生化特性均符合肺炎克雷伯氏菌的生化反应特性,其16S r RNA及khe基因序列与G enB ank中肺炎克雷伯氏菌株之间的同源性均高达99%,因此,可将分离菌确定为肺炎克雷伯氏菌,并将其命名为YZ2015。动物试验及耐药性试验结果表明,分离菌具有较强的致病性和多重耐药性。遗传进化分析表明,分离菌的fim H、mrk D及wab G基因与肺炎克雷伯氏菌其他菌株具有很高的同源性,其核酸序列相似性高达95%以上。
- 冯娜高翔肖敏宁建刚邢小勇包世俊
- 关键词：肺炎克雷伯氏菌药敏试验
- 猪支气管败血波氏杆菌外膜蛋白OmpQ基因的克隆表达及多抗血清的制备被引量：1
- 2018年
- 为研究猪源性支气管败血波氏杆菌外膜蛋白OmpQ的功能及免疫原性，本研究参照GenBank中支气管败血波氏杆菌S798株的外膜蛋白OmF·Q基因序列设计引物，通过PCR扩增技术获得OmpQ基因，测序后进行同源性分析，并将其克隆至pET-28a（＋）载体，构建重组质粒pET-OmpQ，转化大肠杆菌Transetta（DE3），经IPTG诱导表达纯化目的蛋白免疫昆明小鼠制备多克隆抗体，Western blot分析其免疫原性。结果显示，表达蛋白相对分子质量大小约为36000，且以包涵体的形式存在。间接ELISA和Western blot结果表明，表达产物具有较好的免疫原性。研究结果为支气管败血波氏杆菌外膜蛋白OmpQ的后续生物学功能研究奠定基础，并为支气管败血波氏杆菌的快速诊断提供数据支持。
- 宁建刚冯娜肖敏高翔温峰琴包世俊邢小勇胡永浩
- 关键词：支气管败血波氏杆菌多克隆抗体
- 基于乙肝核心抗原和猪流行性腹泻病毒S蛋白B细胞复合表位基因重组疫苗的免疫原性研究被引量：1
- 2020年
- 为了研制新型、有效的猪流行性腹泻病毒(PEDV)疫苗,本研究以乙肝核心抗原蛋白(HBcAg)作为多表位免疫原的载体蛋白,将PEDV S蛋白中的3个B细胞表位基因与S1截短序列基因串联后,插入到编码HBcAg的免疫显性区的基因中,构建重组质粒HBcAg-PE,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。重组蛋白HBPE经过纯化和Western-blot鉴定后,以不同剂量的重组蛋白通过肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,对其免疫效果进行了初步评价。结果显示,重组蛋白HBPE在BL21(DE3)中以沉淀形式表达,纯化、复性后的重组蛋白HBPE能够与PEDV阳性血清发生特异性反应。重组蛋白HBPE能够刺激小鼠产生抗PEDV特异性抗体,同时可以产生相关的Th1型和Th2型细胞因子。上述结果表明,本研究成功构建了PEDV重组B细胞复合表位抗原HBPE,并在小鼠模型中初步评价了其免疫原性,为今后新型PEDV基因工程疫苗的研制提供了新的思路。
- 李卫严刘新生赵东红张莉萍高翔杜晓华杜晓华
- 关键词：猪流行性腹泻病毒乙肝核心抗原免疫原性
