李玲玲
- 作品数：22 被引量：49H指数：4
- 供职机构：中山大学附属第五医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 杆状病毒Ac60基因的原核表达与亚细胞定位研究
- 2009年
- 用PCR方法从AcMNPV基因组中扩增到ORF60基因,插入原核表达载体pET-28a(+),构建pET-Ac60质粒,再将该质粒转化大肠埃希菌BL21,在IPTG诱导下表达了分子量约为16 ku的融合蛋白。用纯化的表达产物免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,应用该抗体检测了AcMNPV感染的昆虫宿主细胞(Sf9)中ORF60基因的表达,结果显示:在感染后的细胞中有2条分子量分别约为33 ku和17 ku蛋白质带能与所制备的抗体发生特异性反应。间接免疫荧光分析发现:在病毒感染的晚期,Ac60蛋白同时存在于所感染宿主的细胞核和细胞质中。
- 李玲玲李朝飞庞义杨凯
- 关键词：苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒原核表达亚细胞定位
- 杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备被引量：1
- 2007年
- 用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以Ni2+-NTA偶连抗体检测证明所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,以纯化的融合蛋白制备多克隆抗体,效价为1/1 024。免疫印迹分析表明,该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。
- 李玲玲李朝飞庞义
- 人源Nodal成熟肽的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2011年
- 目的:表达人Nodal成熟肽,免疫小鼠制备其多克隆抗体。方法:构建原核表达质粒pReceiver-hNodal,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达His6-hNodal融合蛋白,融合蛋白经Ni-NTA树脂亲和纯化后,回收融合蛋白,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。通过间接ELISA、Westernblot和免疫细胞化学染色和间接免疫荧光等方法检测抗体的效价和特异性。结果:在大肠杆菌中高效表达了与预期理论值大小相符的Mr约13 000的人Nodal成熟肽的融合蛋白,通过免疫小鼠制备的多克隆抗体效价高、特异性强。结论:成功制备了抗人Nodal成熟肽多克隆抗体,为进一步深入研究Nodal在肿瘤发生发展过程中的生物学功能奠定了基础。
- 李玲玲江冠民张革王昊方瑞杜军
- 关键词：原核表达纯化多克隆抗体
- STAT3抑制剂S3I-201对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响
- 2023年
- 目的 研究STAT3小分子抑制剂S3I-201对人肝癌细胞系BEL-7402增殖、凋亡与细胞周期的影响和初步的作用机制。方法 分别采用细胞活性检测试剂盒cell couting kit-8(CCK-8)和EdU细胞增殖法检测S3I-201对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖的影响,应用流式细胞术分析S3I-201对BEL-7402的细胞凋亡和周期的影响,通过Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 CCK-8及EdU结果显示,S3I-201能抑制BEL-7402细胞的生长和增殖(P<0.05),使BEL-7402细胞阻滞于S期,具有诱导细胞凋亡的作用,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达(P<0.05)。结论 STAT3小分子抑制剂S3I-201通过促进BEL-7402凋亡、上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并将BEL-7402阻滞于S期而发挥抗肿瘤效应。
- 李玲玲林斯晓周文英彭晓谋
- 关键词：增殖凋亡细胞周期
- 甜菜夜蛾核多角体病毒(SeMNPV)ORF100和ORF101基因的克隆、表达与纯化被引量：2
- 2007年
- 目的:构建甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)ORF100(Se100)和ORF101(Se101)基因的原核表达载体,表达并纯化两种蛋白。方法:用PCR方法扩增Se100和Se101基因,分别将它们克隆至原核表达载体pQE-30上,转化宿主菌M15[pREP-4],用IPTG进行诱导表达,表达产物用Ni-NTA金属螯合层析法进行纯化,SDS-PAGE检测表达的目的蛋白。结果:构建了分别含有Se100和Se101基因的原核表达质粒pQE100和pQE101;SDS-PAGE检测显示,表达的两个融合蛋白的分子量分别为15kDa和31kDa,比预期分子量稍大;Ni-NTA亲和层析结果显示:6×His-Se100和6×His-Se101融合蛋白主要存在于pH值为4.5的缓冲液中。结论:成功克隆并高效表达了Se100和Se101两个基因,有效纯化了两种蛋白,为深入进行基因的功能研究奠定了基础。
- 李玲玲李朝飞庞义
- 关键词：甜菜夜蛾核多角体病毒原核表达纯化
- Notch通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤TLR4介导的炎症反应中的作用被引量：19
- 2016年
- 目的:探讨Notch通路对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)中Toll样受体4(TLR4)介导的炎症反应的作用。方法:雄性SD大鼠75只随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IRI组)和γ-分泌酶抑制剂DAPT干预组(DAPT组)。分别于再灌注6 h、12 h、24 h、48 h、72 h时点观察各组肾脏病理改变,检测血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平,ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,免疫组化和Western blot分别检测大鼠肾脏Notch1、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平。结果:在IRI组,呈现不同程度的以肾小管上皮细胞和间质损伤为主的肾脏病理改变,BUN、Scr及血清炎性因子TNF-α、IL-6含量在各时点均显著高于sham组(P<0.05),而在DAPT干预组,在各时点肾脏病理损伤明显减轻,BUN、Scr和血清TNF-α、IL-6水平均显著低于IRI组(P<0.05)。Notch1、TLR4和NF-κB p65主要表达于肾小管上皮细胞胞质中,在sham组仅有微量表达,在IRI组则有高表达,在各时点表达与sham组相比均显著增强(P<0.05),而在DAPT组,各因子的表达水平在各时点均较IRI组显著降低(P<0.05)。结论:大鼠肾脏IRI出现显著的肾功能及肾脏病理改变,血清炎性因子TNF-α和IL-6水平升高,Notch1、TLR4及NF-κB p65在肾组织中表达增强;而DAPT可通过抑制Notch1活化和TLR4/NF-κB通路,抑制TLR4所介导的炎症反应,从而发挥肾脏保护作用。
- 徐晓嫦朱晔张慧涛陈萍祯郑晶贾宁林宇静李玲玲张桦
- 关键词：肾脏缺血再灌注损伤NOTCH通路TOLL样受体4
- TSA通过抑制STAT1磷酸化与核转位下调人肝癌细胞HepG2内IDO的表达被引量：1
- 2011年
- 目的:研究曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)下调γ干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)诱导的人肝癌细胞HepG2内吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)表达的分子机制。方法:Western blot检测TSA在IFN-γ诱导的HepG2细胞中IDO的表达、信号转导及转录激活子1(STAT1)的磷酸化和干扰素调节因子1(IRF-1)的诱导表达情况。用免疫细胞化学法检测TSA处理HepG2细胞后对IDO表达的影响。流式细胞术分析TSA处理后IFN-γ受体2表达量的变化,进一步在激光共聚焦显微镜下观察TSA对STAT1核转位的影响,利用双荧光素酶报告基因系统检测TSA对IFN-γ激活位点(γ-activated sites,GAS)、干扰素刺激应答元件(interferonstimulated response elements,ISRE)和核因子-κB(NF-κB)的激活的影响。结果:TSA以剂量依赖方式下调HepG2细胞内IFN-γ诱导的IDO表达、能明显抑制STAT1第701位酪氨酸的磷酸化和STAT1的核转位,但是上调IFN-γ受体2受体的表达。双荧光素酶报告基因分析和Westernblot结果表明:TSA能显著抑制GAS和IRF-1的激活却不能抑制NF-κB和ISRE的激活。结论:TSA能下调IFN-γ诱导的HepG2细胞中IDO的表达,其机制可能是与其抑制STAT1的磷酸化和核转位,以及抑制STAT1与GAS的结合有关,而不是通过下调IFN-γ受体的表达来实现的。
- 李玲玲江冠民张革衣艳梅张帆杜军
- 关键词：TSASTAT1核转位肝癌IDO
- 杆状病毒AcMNPV vp39基因的克隆、表达与抗体制备被引量：2
- 2007年
- 目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,纯化的融合蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔,Western blot检测抗体活性。结果:构建了pET-VP39原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导超量表达了一个与预期理论值相符的约为40kDa的融合蛋白。对制备的抗体进行免疫印迹分析表明该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。结论:获得了兔抗AcMNPV-VP39多克隆抗体,为进一步深入研究VP39在病毒侵染过程中与宿主因子的相互作用提供了检测工具。
- 李玲玲李朝飞陈维春庞义
- 关键词：苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒原核表达抗体
- CYP2C19基因多态性对含泮托拉唑四联法治疗幽门螺杆菌疗效的影响被引量：3
- 2018年
- 目的探讨CYP2C19基因多态性对含泮托拉唑的四联疗法治疗幽门螺杆菌(Hp)疗效的影响,并观察CYP2C19基因多态性与质子泵抑制剂药物不良反应的相关性。方法 113例经电子胃镜或14C呼气试验证实Hp阳性同时有反复的消化道症状的慢性胃炎患者,给予泮托拉唑40 mg,bid+枸橼酸铋钾220 mg,bid+左氧氟沙星片0. 5 g,qd+阿莫西林克拉维酸钾0. 914 g,bid四联疗法根除Hp,疗程10 d,疗程结束后4～6周内行14C呼气试验评估疗效。采用多聚酶链-限制性片段长度多态性方法检测CYP2C19基因多态性,并据其分组,即强代谢表型(EM)组、中间代谢表型(IM)组和弱代谢表型(PM)组。观察各组间Hp根除率、临床症状缓解情况和不良反应发生情况。结果 (1)10 d含泮托拉唑四联方案Hp总根除率为78. 8%,CYP2C19 EM型、IM型和PM型的Hp根除率分别为72. 1%、80. 0%、89. 5%,各基因型间Hp根除率差异无统计学意义(P>0. 05);(2)该四联疗法总症状缓解率为93. 8%;出现不良反应8人,总的不良反应发生率7. 07%,EM、IM和PM组不良反应发生率分别为4. 65%、1. 96%、26. 3%,组间差异有统计学意义(P <0. 01)。结论 CYP2C19基因多态性对含泮托拉唑的四联法根除Hp的疗效影响不大。有必要进行大样本的研究,并考虑更多的因素对其疗效的影响。
- 黄译莹李玲玲孙环环卫金歧
- 关键词：CYP2C19基因多态性幽门螺杆菌根除率泮托拉唑
- HSP72在肾小球内皮-间充质细胞转分化中的作用
- 目的 探讨热休克蛋白72(HSP72)在肾小球内皮细胞-间充质细胞转分化(EndMT)中的作用.方法 用TGF-β1( 25ng/ml)诱导人肾小球内皮细胞转分化,并使用不同浓度的谷氨酰胺(GLn,0～12mmol/L)...
- 郑晶张桦贾宁张慧涛林琳朱伟平李玲玲李中和
