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ED-L2-LMP1-EGFP融合基因慢病毒载体的构建及鉴定: 2007年; 目的构建及鉴定EB病毒LMP1基因和增强型绿色荧光蛋白基因融合慢病毒表达载体。方法应用DNA重组技术,将EB病毒ED-L2启动子和LMP1基因克隆到带有EGFP基因的FUGW慢病毒表达载体上,筛选阳性克隆,经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组载体后,以脂质体介导法将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMVΔ8.9、包膜基因VSVG和带目的基因ED-L2-LMP1-EGFP载体共同转染到293FT包装细胞内包装病毒,荧光显微镜下观察包装细胞报告基因表达情况,收集病毒上清、浓缩鉴定、测定重组病毒的滴度。PCR和免疫组化鉴定LMP1表达。结果融合慢病毒表达载体质粒限制性酶切分析证实有782bp的ED-L2和1300bp的LMP1基因片段基因片段插入到慢病毒载体中。转染重组ED-L2-LMP1-EGFP慢病毒融合载体的细胞于荧光显微镜下呈绿色荧光;对该细胞PCR可以扩增出404bp大小的LMP1基因片段和370bp的EGFP基因片断;免疫组化证明LMP1蛋白在转染细胞表达阳性。结论成功构建了ED-L2-LMP1-EGFP基因的慢病毒表达载体,为进一步在体研究LMP1基因的功能奠定了基础。; 张庆玲杨玉芳丁彦青; 关键词：EB病毒 EB病毒潜伏膜蛋白1 慢病毒基因表达

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杨玉芳