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川芎咖啡酸-O-甲基转移酶基因的克隆及序列分析被引量：3: 2016年; 克隆川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)咖啡酸-O-甲基转移酶(COMT)基因并做序列分析。采用RT-PCR方法,以新鲜的川芎嫩叶c DNA为模板,克隆出川芎COMT基因的c DNA序列。此基因全长1328 bp,编码360个氨基酸。将得到的序列提交Gen Bank,序列号为KU942388。此川芎COMT具有植物O-甲基转移酶家族特征性的功能结构域,与中粒咖啡、牵牛花COMT的氨基酸序列同源性分别为70%、69%,推测其能够催化咖啡酸的氧甲基化反应。该川芎COMT基因的成功克隆为下一步活性验证及利用生物技术来生产阿魏酸奠定坚实基础。; 朱建全向缅李洋洋俞继华张赶王万军廖海周嘉裕; 关键词：川芎克隆

川芎α‑淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂基因及表达产物的纯化方法: 本发明公开了一种川芎α‑淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂基因SEQ ID NO.1及其编码的蛋白SEQ ID NO.2，以及表达产物的纯化方法。与水稻(Oryza sativa(L.)Genbank:P29421)α‑淀粉酶...; 廖海周嘉裕俞继华李洋洋向缅朱建全

川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶(LCCOMT)的固定化及结构生物学研究: 川芎（Ligusticum chuanxiongHort）以根茎入药，为四川省著名道地药材，主要用于治疗偏头痛、风湿性关节痛、月经失调、跌打损伤、心血管疾病等，其指标成分为阿魏酸。现代研究证明阿魏酸及其衍生物有保护神经系...; 朱建全; 关键词：川芎

HPLC测定决明不同组织中大黄酚和橙黄决明素含量被引量：1: 2017年; 为了测定决明不同组织中大黄酚和橙黄决明素的含量。分别收集了决明种子、根、茎、花、叶、果荚、子叶、胚轴、愈伤与不定根等组织,利用回流提取法提取大黄酚与橙黄决明素,高效液相色谱法(HPLC)进行含量测定。采用依利特反相色谱柱,以大黄酚和橙黄决明素为指标,以乙腈-0.1%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,流速1 m L/min,检测波长为284 nm,柱温30℃。结果表明:大黄素型蒽醌类化合物在决明中的分布具有明显的组织特异性,其中,决明种子、胚轴、不定根、子叶与愈伤组织中含有大黄酚与橙黄决明素,决明根中仅含有大黄酚,其余组织不含有大黄酚与橙黄决明素,其余总蒽醌含量依次为子叶>不定根>愈伤组织>胚轴>根>花。决明种子成熟过程中,大黄酚的含量呈现"波浪式上升"的趋势,峰值出现在11月下旬;而橙黄决明素的含量呈现"先上升后下降"的趋势,峰值出现在11月中旬。由于大黄酚与橙黄决明素的含量在决明不同成熟时期分别出现峰值,建议采收11月下旬的决明种子以获得大黄酚,采收11月中上旬的决明种子以获得较多的橙黄决明素。; 邓银靳学张娴朱建全向缅谭艳廖海周嘉裕; 关键词：HPLC 大黄酚橙黄决明素

决明胰蛋白酶抑制剂1活性相关残基的定点突变与抑制活性分析被引量：2: 2016年; 决明胰蛋白酶抑制剂1(Co TI1)属于Kunitz胰蛋白酶抑制剂家族成员,通过序列比对预测Arg86、Leu84和Thr88等3个氨基酸残基可能是Co TI1发挥抑制作用的关键残基。通过定点突变的方法将Arg86、Leu84与Thr88残基分别突变为Asp残基,并考察各突变体对胰蛋白酶及棉铃虫等鳞翅目害虫消化酶的抑制作用。与Co TI1相比,Co TI1^(R86D)、CoTI1^(T88D)与CoTI1^(L84D)突变体对胰蛋白酶的抑制活性分别下降了93%、64%与59%;对棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾等3种鳞翅目害虫消化酶的平均抑制活性分别下降了88.7%、57%与60.7%。以上结果表明Arg86、Leu84与Thr88是Co TI1发挥抑制作用的关键残基,这为Co TI1的抑制分子机制及抗虫研究提供了重要的理论依据。; 向缅朱建全俞继华李洋洋李娟娟刘祖碧王万军廖海周嘉裕; 关键词：决明胰蛋白酶抑制剂定点突变

HPLC法测定不同胁迫条件下川芎根中阿魏酸的含量被引量：4: 2017年; 目的测定不同胁迫条件下川芎根中阿魏酸的含量。方法 HPLC法,依利特Hypersil ODS2(4.6mm×200mm,5μm),流动相0.1%的磷酸-甲醇(66:34)等度洗脱,流速1m L/min,检测波长为323nm,柱温30℃。结果阿魏酸进样量在0.3~2.0μg时线性关系良好,r=0.9995,平均回收率为98.3%,RSD为2.1%。对不同胁迫条件下川芎根中阿魏酸的含量测定结果表明,川芎盐胁迫组中的阿魏酸含量最高,干旱胁迫组次之,低温胁迫组最少,但均高于空白组。结论盐、干旱、低温三种胁迫方式均能使川芎根中阿魏酸蓄积。; 朱建全向缅孙梦杰许洁云廖海周嘉裕; 关键词：川芎阿魏酸 HPLC

川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶的原核表达与条件优化被引量：2: 2016年; 以川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶基因(LCCOMT)为表达对象,将含有6*His标签的LCCOMT基因连接pET28a表达载体后转化大肠杆菌BL21,采用原核表达的方法,优化了LCCOMT基因的表达条件。结果表明:当诱导时间为4h,IPTG终浓度为2.0mmol·L-1,诱导温度为37℃时,重组LCCOMT蛋白的表达量达到最大。溶解性检测结果表明,LCCOMT重组蛋白以可溶性蛋白的形式存在,占总蛋白的9%,该试验可为LCCOMT的大规模表达纯化奠定基础。; 宋婧朱建全张泉宝张赶周嘉裕; 关键词：川芎原核表达

一种生产阿魏酸的固定化基因工程酶的制备方法: 本发明公开了一种生产阿魏酸的固定化基因工程酶的制备方法，将海藻酸钠于50～85℃水中搅拌溶解，使其质量分数为0.5％～4.5％，冷却至室温后加入100μg重组化川芎咖啡酸‑3‑O‑甲基转移酶，在4℃层析冷柜中用磁力搅拌器...; 廖海周嘉裕朱建全向缅李洋洋俞继华邓银张娴吴微波; 文献传递

川芎α-淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂基因及表达产物的纯化方法: 本发明公开了一种川芎α‑淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂基因SEQ ID NO.1及其编码的蛋白SEQ ID NO.2，以及表达产物的纯化方法。与水稻(Oryza sativa(L.)Genbank:P29421)α‑淀粉酶...; 廖海周嘉裕俞继华李洋洋向缅朱建全; 文献传递

川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶的同源建模和定点突变被引量：2: 2016年; 目的构建川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶(Ligusticum chuanxiong caffeic acid-3-O-methyltransferase,LCCOMT)的三维模型,并利用定点突变对模型进行验证。方法利用同源建模构建LCCOMT的初始三维模型;对初始三维模型进行动力学优化;将优化后的模型对接咖啡酸,预测LCCOMT的活性位点;对预测的活性位点展开定点突变,检测突变型蛋白的生物活性。结果 LCCOMT的三维模型能够与咖啡酸成功对接,His268残基可能是LCCOMT的活性位点,推测其能够与咖啡酸3-OH形成氢键。H268N与H268Q2种突变酶分别丧失94.85%和95.28%的催促活性。结论同源建模能够准确预测LCCOMT的三维模型。His268为LCCOMT的关键氨基酸残基,其作用可能是作为共轭碱,参与咖啡酸3-OH的去质子化反应。; 俞继华李洋洋宋婧李娟娟张赶朱建全向缅王万军廖海周嘉裕; 关键词：川芎同源建模

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朱建全