李玉凤
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- 大鼠肝内淋巴细胞的分离与培养
- 2018年
- 目的建立一种简单易行的大鼠肝内原代淋巴细胞分离与培养方法,为肝脏免疫学研究提供可靠的体外细胞模型。方法采用原位灌注及密度梯度离心法分离培养,即在无菌条件下取大鼠正常肝脏组织,研磨后,利用离心法及淋巴细胞分离液进行纯化,通过倒置生物显微镜对所培养细胞进行形态学观察,并结合流式细胞术来鉴定大鼠T淋巴细胞。结果通过倒置生物显微镜观察到细胞呈典型的淋巴细胞形态,流式细胞术分析显示,T细胞比例为51.2%。结论本实验利用原位灌注及密度梯度离心法相结合的方式,成功分离和培养了大鼠肝内淋巴细胞,操作简单,重复性好,成功率高,为进一步开展肝脏的免疫学研究提供了非常好的体外细胞模型。
- 张曼卡马慧敏张健李玉凤叶小慧李鑫
- 关键词：密度梯度离心法
- 北京市多中心门诊2型糖尿病患者的抑郁患病率及影响因素研究
- 王丹丹史琳涛郭晓惠李玉凤徐媛尹士男吴艳巧杨宇庄晓明盖迎丽李全民刘彦君
- Colgalt2基因敲除小鼠Kupffer细胞形态及亚型差异被引量：3
- 2016年
- 目的从Colgalt2基因敲除小鼠肝脏内分离Kupffer细胞,并比较其与正常小鼠Kupffer细胞形态分化和亚型分化的差异。方法采用胶原酶灌注法、percoll密度梯度离心法和免疫磁珠分选法分离纯化Kupffer细胞,并将分离的Kupffer细胞进行培养,显微镜下观察其形态的变化和差异。用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)分别刺激Kupffer细胞6小时、12小时和24小时,检测细胞亚型。结果分离获得Kupffer细胞数目为(4.42±0.63)×10~6/鼠肝,流式细胞仪检测细胞纯度为97.9%。培养后的细胞逐渐延伸为不规则形态,早期Colgalt2基因敲除小鼠Kupffer细胞形态分化相比正常小鼠有延迟,后期两者无显著差异。在未刺激状态下,Colgalt2^(-/-)小鼠M1型Kupffer细胞的比例小于Colgalt2^(+/+)小鼠,Colgalt2^(-/-)小鼠M2a型Kupffer细胞所占比例较高;LPS刺激6小时后,Colgalt2^(-/-)小鼠M2a型所占比例高于Colgalt2^(+/+)小鼠;LPS刺激12小时后,Colgalt2^(+/+)小鼠M2a型和M2c型Kupffer细胞所占比例小于Colgalt2^(-/-)小鼠;LPS刺激24小时后,Colgalt2^(-/-)小鼠M2c型细胞所占比例高于Colgalt2^(+/+)小鼠。结论应用胶原酶灌注法、percoll密度梯度离心法、免疫磁珠分选法可以获得纯度较高的小鼠肝脏Kupffer细胞,为后期的细胞实验奠定基础。Colgalt2基因的敲除会影响小鼠Kupffer细胞的形态分化和亚型分化。
- 王建文张一帆李玉凤杨琪郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：基因敲除KUPFFER细胞细胞形态
- 敲除Colgalt2基因加重小鼠急性肝损伤
- 2016年
- 目的：初步探讨Colgalt2基因介导的胶原Glcα1，2 Galβ1？糖基化修饰在急性肝损伤过程中的作用。方法取60只Colgalt2＋／＋小鼠和60只Colgalt2－／－小鼠进行急性肝损伤实验，雌雄各半。每组随机选取20只小鼠腹腔注射CCl4（CCl4∶橄榄油＝2∶7，20 ml／kg）。观察小鼠死亡情况，并绘制生存曲线。每组剩余40只小鼠随机分为0、4、8、12 h组，每组10只，腹腔注射CCl4（剂量同上）。分别于0、4及8 h各处死6只小鼠，之后将4及8 h组剩余的小鼠均纳入12 h组（ Colgalt2＋／＋小鼠， n＝14； Colgalt2－／－小鼠， n＝16），并于12 h处死小鼠。 HE染色观察肝组织的病理学改变，取血清进行生化指标ALT、 AST测定。利用qRT？PCR和Western印迹技术检测小鼠Colgalt2在基因及蛋白水平的表达情况。结果Colgalt2基因在Col？galt2＋／＋小鼠肝组织内表达，而在Colgalt2－／－小鼠肝组织内不表达。注射CCl4后10 h， Colgalt2＋／＋小鼠死亡率为35％， Colgalt2－／－小鼠死亡率为70％，两组小鼠死亡率差异显著（P＜0．05）。注射CCl4后12 h， Colgalt2＋／＋小鼠死亡率达50％， Colgalt2－／－小鼠死亡率为70％，差异不显著（P＞0．05）。肝功检测及HE染色结果均提示，与Colgalt2＋／＋小鼠相比， Colgalt2－／－小鼠肝损伤较重。注射CCl4后，野生型小鼠Colgalt2在RNA水平和蛋白水平表达下调。结论 Colgalt2基因敲除在一定程度上可加重小鼠急性肝损伤。该观察结果提示， Colgalt2基因介导的胶原Glcα1，2 Galβ1？糖基化修饰可能与肝损伤的修复有关。
- 杨琪王建文王智强刘燃李玉凤张一帆郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：CCL4急性肝损伤糖基转移酶
- CRISPR/Cas9介导的Fam171a1基因敲除大鼠基因型鉴定及基因功能的初步研究
- 2017年
- 目的通过建立Fam171a1基因敲除大鼠模型,观察基因敲除后大鼠的表型变化,探索该基因的功能。方法采用CRISPR/Cas9打靶技术,获得Fam171a1^(+/-)基因型杂合子。Fam171a1^(+/-)大鼠交配获得Fam171a1^(-/-)基因型纯合子大鼠。采用DNA Analyzer 3730XL测序技术进行基因型鉴定。对功能未知基因Fam171a1进行基本生物信息检索。检测FAM171A1蛋白在野生型大鼠(wild type,WT)和Fam171a1^(-/-)基因型大鼠各组织的表达情况。对子代鼠20天体重、子代生育情况进行统计。采用全自动生化仪对血清生物化学指标进行检测。结果获得了稳定遗传的Fam171a1^(-/-)基因型大鼠。通过配笼繁殖共获得F2代125只,纯合子(Fam171a1^(-/-))25只、杂合子(Fam171a1^(+/-))71只、野生型(WT)29只,比例接近1∶2∶1。FAM171A1蛋白在WT大鼠肝脏等主要脏器表达,其中肺组织、脑组织和胰腺组织表达量较高,心、肝、脾和淋巴结中表达较弱,肾、胸腺和小肠组织中弱表达或不表达。同时,Fam171a1^(-/-)基因型大鼠各组织中不表达FAM171A1蛋白。Fam171a1^(-/-)子代大鼠出生20天体重显著低于WT大鼠(t=3.211,P=0.0017)。成年Fam171a1^(-/-)大鼠血清胆碱酯酶、总蛋白、AST和HDL水平显著高于WT(t=4.18,P<0.001;t=6.26,P<0.001;t=2.73,P=0.02;t=2.36,P=0.03)。与Fam171a1^(+/-)大鼠相比,Fam171a1^(-/-)大鼠生育能力无显著差异(t=0.2132,P=0.8330)。结论成功获得稳定遗传的Fam171a1基因敲除大鼠,Fam171a1基因可能参与SD大鼠的生长发育、肝功能的维持及脂代谢的调控。
- 李玉凤杨琪王建文叶小慧张曼卡郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：膜蛋白胆碱酯酶脂代谢
