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猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的C和D线性抗原表位的抗原性比较被引量：3: 2016年; 为比较猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白含有的两个线性抗原表位(C和D)的抗原性,本研究采用Dot-ELISA方法对原核表达的S蛋白抗原C和D的两种线性表位重组蛋白进行了抗原性比较分析。结果表明,在等质量或等摩尔的条件下,含有抗原线性表位C的重组蛋白的抗原性弱于含有抗原线性表位D的重组蛋白。本研究为建立TGEV感染的血清学诊断方法,以及进一步研究抗原线性表位C和D的结构及功能奠定了基础。; 于天飞张喜文朱可佳陈刚李赫陆泽谢鹏宇; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白抗原性

病毒样颗粒及其原核表达制备的研究进展被引量：3: 2016年; 病毒样颗粒（virus—like particles，VLPs）的形态结构与天然病毒高度相似，且易于被免疫系统识别，能激发机体产生保护性免疫应答。VLPs不含有病毒基因，安全性高，很多抗原可以通过基因工程或化学耦连的方法在其表面展示，是一种理想的疫苗载体，可用于疫苗的研发。通过蛋白表达系统表达病毒衣壳蛋白是制备VLPs的主要手段。原核表达系统已经被广泛应用于基因工程药物的生产，具有安全性好、生产周期短、易于扩大生产等优点，可用于VLPs的制备。本文介绍了VLPs的结构及诱导免疫应答的方式，重点综述了利用原核表达系统制备VLPs的进展。; 于天飞张喜文谢鹏宇黎明樊兴冬闫冰; 关键词：原核表达病毒样颗粒疫苗

猪传染性胃肠炎病毒S蛋白C和D抗原位点在大肠杆菌中的串联表达: 2016年; 使用大肠杆菌偏好性密码子人工合成了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白C和D抗原位点多肽基因序列。依次将C和D抗原位点多肽基因序列克隆至表达载体p ET-32a中。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达,收集诱导的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western Blot分析。结果显示,在分子量25 k Da处有1条明显的蛋白表达条带,且能被TGEV阳性血清识别。本研究为TGEV的血清学检测方法的建立提供了必要的物质基础。; 于天飞陈刚张双史俊龙朱可佳张喜文; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白抗原位点

番鸭细小病毒病实验室诊断方法的研究进展被引量：1: 2016年; 番鸭细小病毒病由番鸭细小病毒（Muscovy duck parvovirus,MDPV）引起,以1~3周龄雏番鸭为易感的一种急性传染性、高死亡率的病毒病。番鸭细小病毒病一般可根据临床症状和剖检病理变化及其流行病学等情况作出初步诊断。然而在染病番鸭表现出非典型症状时很容易与番鸭的鹅细小病毒感染、雏鸭病毒性肝炎等疾病混淆,容易误诊。因此,对该病的确诊主要依靠血清学或病原学等实验室诊断方法。文章从血清学和分子生物学诊断方法两个方面综合阐述了番鸭细小病毒检测方法的研究进展。; 黎明樊兴冬闫冰于天飞张喜文于志丹; 关键词：血清学分子生物学

猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原表位C的串联表达研究被引量：5: 2017年; 为比较含有猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白抗原表位C不同表位密度的重组蛋白的抗原性,本研究将抗原表位C的编码核酸序列进行串联,构建了重组表达质粒pET-(C_1C_2)_2~p ET-(C_1C_2)_6,并在原核表达系统中表达了重组蛋白。Western blot分析表明,表达的6种重组蛋白r-C_1C_2~r-(C_1C_2)_6均具有良好的抗原性。采用Dot-ELISA方法对各重组蛋白进行了抗原性比较分析。结果表明,含有12个表位肽的重组蛋白r-(C_1C_2)_6的抗原性强于其它重组蛋白。本研究制备的串联重组蛋白为建立TGE血清学诊断方法奠定了物质基础。; 于天飞董慧莹张喜文谢鹏宇王有祺孙婉姝; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白

猪传染性胃肠炎病毒血清抗体Dot-ELISA检测方法的建立被引量：2: 2018年; 为快速检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)抗体,本研究以原核表达系统串联表达的含有TGEV S蛋白抗原表位C的重组蛋白r-(C_1C_2)6为包被抗原建立TGEV血清抗体的Dot-ELISA检测方法。经反应条件优化结果显示,抗原最适包被量为62.5 ng/点;血清最佳工作浓度和工作时间分别为1∶80和45 min;羊抗猪IgG-HRP最佳工作浓度和工作时间分别为1∶800和45 min;最适封闭条件分别为5%脱脂乳37℃,45 min;血清和酶标抗体最适反应温度均为37℃;最佳显色时间7.5 min。结果显示该方法与猪轮状病毒和猪流行性腹泻病毒阳性血清无交叉反应,表明其具有良好的特异性。该方法对TGEV阳性血清最低检测限为1∶1 280。采用建立的Dot-ELISA对27份临床猪血清样品进行检测,结果显示Dot-ELISA与TGEV/PRCV抗体检测试剂盒检测结果的符合率为92.6%。本研究建立的Dot-ELISA检测方法简便、快速、灵敏、特异,适合用于TGE快速诊断。; 于天飞董慧莹董慧莹张喜文谢鹏宇孙婉姝; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒 DOT-ELISA

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张喜文