胡玮
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- 反刍兽月形单胞菌β-木糖苷酶基因在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质
- 2017年
- β-木糖苷酶(β-xylosidase,酶编号EC 3.2.1.37)是木聚糖降解酶系中的重要组成部分。本研究以毕赤酵母Pichia pastoris GS115为宿主菌尝试表达反刍兽月形单胞菌Selenomonas ruminantium中的β-木糖苷酶基因Sxa。根据毕赤酵母对密码子的偏爱性、mRNA二级结构、GC含量和稀有密码子,对Sxa基因进行优化;通过基因合成技术获得了全长基因mSxa并构建重组酵母表达载体pPIC9K-mSxa;以BglⅡ酶切重组载体pPIC9K-mSxa,电击转化将m Sxa基因导入毕赤酵母GS115中,获得的转化子经过表型和遗传霉素G418抗性筛选、PCR鉴定,得到表达β-木糖苷酶基因的工程菌GS115-pPIC9K-mSxa;通过活性测定获得高效表达β-木糖苷酶的重组酵母,并对重组β-木糖苷酶的酶学性质进行了初步研究。结果表明,重组β-木糖苷酶的分子量约为66 kDa。在发酵罐水平表达的酶活性达到了287.61 IU/mL。对酶学性质研究显示,该酶在温度为40-60℃,pH为5.0-7.0时较稳定,其最适反应温度和pH分别为55℃和6.0,专一性地作用于β-木糖苷键。Mn^(2+)和Ca^(2+)对该酶具有激活作用,而Fe^(3+)、Cu^(2+)、Co^(2+)、Mg^(2+)、EDTA及SDS抑制其酶活性。本研究首次将反刍兽月形单胞菌的β-木糖苷酶基因转化到毕赤酵母中获得表达,并具有较高活性,为进一步工业化应用奠定了基础。
- 付婷婷胡玮陈勇魏欢杨光
- 关键词：Β-木糖苷酶毕赤酵母异源表达酶学性质
- Paecilomyces sp.FLH30内切β-1,3(4)葡聚糖酶基因和Selenomonas ruminantium木糖苷酶基因在毕赤酵母中的表达
- Pecilomyces sp.FLH30中的内切β-1，3(4)葡聚糖酶对植物的细胞壁具有降解的功效，可以高效的水解植物细胞壁。Selenomonas ruminantium是反刍动物瘤胃内的一种优势菌，源于Seleno...
- 胡玮
- 关键词：葡聚糖酶
- 文献传递
- 源于Paecilomyces sp.FLH30内切β-1,3(4)葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2016年
- 【目的】β-1，3（4）-葡聚糖酶是一种重要的工业用酶，广泛地应用于饲料业、酿造业及纺织业。【方法】以来源于Paecilomyces sp．FLH30的葡聚糖酶基因为研究对象。据毕赤酵母GS115对密码子的简并性和偏爱性，对来源于淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus）β-1，3（4）-葡聚糖酶基因进行了优化，通过全基因技术合成了全长基因GLUnm并构建重组酵母表达载体pPIC9K—GLUnm，用SacI线性化重组质粒pPIC9K—GLUnm，电击转化至毕赤酵母GS115中进行表达。【结果】通过表型筛选，遗传霉素抗性筛选，经PCR鉴定表明，葡聚糖酶基因整合至酵母染色体DNA中。在试管中经甲醇诱导表达，并测定葡聚糖酶酶活性。在试管水平表达的酶活性是0．68IU／mL，即可以认为在摇瓶表达水平的初始酶活性为0．68IU／mL，将此菌株在摇瓶水平表达，酶活性在表达84h为最高，是11．26IU／mL。【结论】重组β-1，3（4）-葡聚糖酶的最适pH为5．0，最适反应温度为50℃，在pH5．0～8．0，温度37—50℃的条件下较稳定。
- 胡玮张慧玲魏欢付婷婷陈勇武运
- 关键词：毕赤酵母酶学性质
