樊帅
- 作品数：25 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金协和青年科研基金宁波市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 多肽IMB-M2的异源表达及其在增强NK细胞杀瘤活性中的应用
- 本发明涉及一种多肽IMB‑M2在增强NK细胞杀瘤活性中的应用。研究表明，多肽IMB‑M2作为细胞因子添加至NK细胞培养体系中，可以提高NK细胞杀瘤活性，有望开发成为一种细胞因子类药物，应用于抗肿瘤的生物治疗中。
- 杨兆勇刘娟娟樊帅金媛媛冯晓州李丹阳邹森
- 文献传递
- 嗜热脂肪芽胞杆菌色氨酰-tRNA合成酶BsTrpRS的表达、纯化及其与创新霉素复合物的单晶制备和X-射线衍射分析
- 2021年
- 目的获得来源于嗜热脂肪芽胞杆菌色氨酰-tRNA合成酶(BsTrpRS)与创新霉素复合物的晶体结构,为创新霉素的理性设计提供结构基础。方法利用大肠杆菌表达系统异源表达获得BsTrpRS可溶性表达,采用亲和层析色谱、离子交换色谱和分子排阻色谱纯化目的蛋白,以期获得纯度在90%以上的BsTrpRS,通过等温滴定量热法检测BsTrpRS与创新霉素的亲和力。选用悬滴-水蒸汽扩散法筛选蛋白质结晶条件,通过优化结晶条件获得高质量晶体,利用上海光源蛋白质晶体学光束线站收集X-ray衍射数据。结果运用分子生物学方法成功构建含bstrprs基因的重组质粒,转化BL21(DE3)得到重组表达菌株。运用亲和层析、离子交换色谱和分子排阻色谱等蛋白纯化技术,获得高纯度BsTrpRS蛋白。利用ITC技术确证创新霉素与BsTrpRS之间亲和力为3.2μmol/L。通过晶体筛选优化,最佳结晶条件为1.8 mol/L K_(2)HPO_(4),pH 7.6,37℃,0.75%(v/v)1,3-丙二醇,最终获得X-ray衍射分辨率为2.06A的BsTrpRS/创新霉素二元复合物晶体,其晶胞参数为a=91.675A,b=91.675A,c=152.37A,α=90.000°,β=90.000°,γ=120.000°,晶体的马修斯系数为2.48A^(3)/Da,最小非对称单位内含有2个蛋白分子,溶剂百分比为50.46%。结论创新霉素与BsTrpRS复合物晶体结构的获得,有望对创新霉素小分子结构优化及设计提供指导方向及重要依据。
- 樊帅吕广新金媛媛杨兆勇
- 关键词：创新霉素X-射线衍射
- 一种靶向真菌细胞壁几丁质合成酶下调剂细胞筛选模型
- 本发明涉及一种靶向真菌细胞壁的几丁质合成酶下调剂高通量筛选模型，属于基因工程领域，所述模型是由UMcsh5基因启动子序列UMPRO，携带荧光素酶报告基因的重组质粒Ppic9KG‑UMPRO‑LUC、稳定表达UMPRO启动...
- 杨兆勇张晓琳赵晨李亚东金媛媛白利平黄颖冯晓洲汪康游樊帅
- 文献传递
- 一种具有抗肿瘤活性的多肽IMB-P1及其应用
- 本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的多肽IMB‑P1及其应用。该多肽的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。该多肽序列较短，易于实现规模化生产；在较低剂量下即显示出显著的抗肿瘤活性；本发明多肽对正常组织无毒性，具有广阔的应用...
- 杨兆勇刘娟娟金媛媛樊帅陈静张志斐孙正阳
- 文献传递
- 一种具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5、编码基因及其应用
- 本发明提供了一种具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5、编码基因及其应用，属于癌症治疗技术领域。所述宿主因子hPRDX5为单一蛋白组分，具有制备重复性好、质量可控的优点，同时对人使用不产生免疫原性，与ACBPs相比具有不可...
- 杨兆勇金媛媛邹森樊帅冯晓吕广新王终博张琦
- 文献传递
- 洋橄榄叶素衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用
- 本发明提供了洋橄榄叶素衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，涉及医药技术领域。本发明提供洋橄榄叶素衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述洋橄榄叶素衍生物具有式I‑1～I‑4所示的任意一种结构，所述抗肿瘤药物包括洋橄榄叶素衍生物和...
- 杨兆勇刘玉凤金媛媛王保国樊帅
- 文献传递
- 定向进化提高人精氨酸酶1的催化活性
- 2024年
- 精氨酸酶1缺乏症(arginase 1 deficiency,ARG1-D)是一种罕见的遗传性代谢疾病,导致患者进行性痉挛性瘫痪、认知障碍和癫痫发作。来源于人源的重组人精氨酸酶1 (recombinant human arginase 1,rhArg1)是其潜在的治疗药物,但还存在活性低、半衰期短等缺陷限制了其临床应用。本研究采用定向进化的方法,通过易错PCR构建rhArg1的随机突变文库,经高通量筛选获得活性提高的突变体,联合点饱和突变探讨了R21和V182位点对活性的影响。研究发现,在反应体系中不含Mn^(2+)的条件下,突变体V182D、V182S、V182H和R21N的k_(cat)值相比于rhArg1提高2.0、1.9、1.7和1.3倍,突变体V182D、V182S、R21D和R21N的k_(cat)/K_(m)分别是rhArg1的2.1、1.7、1.4和1.4倍。突变体R21D和V182L对底物的亲和力有所增强。本研究通过定向进化和点饱和突变获得了rhArg1活性提高的突变体,从而提升了其在医疗领域的应用前景。
- 冯翠月王晨宇唐梦佳樊帅杨兆勇张志斐
- 关键词：定向进化
- 人过氧化物还原酶-5在诱导人脐带间充质干细胞向神经干细胞分化中的应用及诱导方法
- 本发明提供了人过氧化物还原酶‑5在诱导人脐带间充质干细胞向神经干细胞分化中的应用及诱导方法，涉及细胞工程技术领域。本发明提供了hPRDX5在诱导人脐带间充质干细胞向神经干细胞分化中的应用，经实施例证实，在UC‑MSCs完...
- 杨兆勇金媛媛史北辰樊帅陈浩东孙越朱贤兑
- 一种靶向真菌细胞壁几丁质合成酶下调剂细胞筛选模型
- 本发明涉及一种靶向真菌细胞壁的几丁质合成酶下调剂高通量筛选模型，属于基因工程领域，所述模型是由UMcsh5基因启动子序列UMPRO，携带荧光素酶报告基因的重组质粒Ppic9KG-UMPRO-LUC、稳定表达UMPRO启动...
- 杨兆勇张晓琳赵晨李亚东金媛媛白利平黄颖冯晓洲汪康游樊帅
- UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶的表达、纯化及与ACHN-975复合物的X-射线衍射分析
- 2019年
- 目的以 UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶(LpxC)-ACHN-975 晶体复合物结构为基础,研究小分子与靶蛋白的结合位点与方式,进而依据复合物结构设计该化合物,以获得活性强、毒性低的药物小分子。方法运用大肠杆菌表达系统对超嗜热菌(Aquifex aeolicus)来源的 AaLpxC 进行异源表达,采用 Zn^2+-NTA 亲和层析、Q-HP 强阴离子交换色谱和 Superose 12 分子排阻色谱对重组蛋白进行分离纯化,对 AaLpxC 进行结构生物学研究,采用蒸汽扩散-悬滴法进行结晶条件筛选以及优化。结果获得纯度在 90%以上的超嗜热菌来源的 AaLpxC,经过结晶条件的优化获得分辨率为 1.21 А(1 А= 1 × 10^-10 m)的 AaLpxC 与 ACHN-975 的复合物晶体的衍射数据,其晶胞参数为 a = 65.569 А,b = 65.569 А,c = 131.595 А,α= 90.000°,β= 90.000°,γ= 120.000°。结论 ACHN-975 与 AaLpxC 复合物晶体结构的获得有望对 ACHN-975 小分子结构优化及设计提供指导方向及重要依据。
- 李丹阳樊帅金媛媛杨兆勇
- 关键词：蛋白纯化
